ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
При ишемии миокарда происходит увеличение экспрессии индуцибельной NO-синтазы (iNOS) - фермента, осуществляющего синтез NO из L-аргинина в больших количествах. NO в небольших количествах является вазодилататором и кардиопротектором, в то время как гиперпродукция NO снижает выживаемость кардиомиоцитов, являясь одним из клю- чевых факторов реперфузионного повреждения. Для коррекции продукции NO в условиях ишемии и ишемии-реперфузии важно знать динамику экспрессии мРНК iNOS и источник синтеза, которым могут быть как кардиомиоциты, так и клетки воспаления. Цель: В моделях необратимой ишемии и ишемии-реперфузии изучить изменение экс- прессии мРНК iNOS в миокарде левого желудочка (ЛЖ) сердца крыс как в зоне, лишен- ной кровотока, так и в областях за пределами этой зоны, через 2, 3, 3.5 и 4 часа от начала ишемии, а так же оценить уровень инфильтрации миокарда клетками воспаления. Материалы и методы: Исследование проводили на самцах белых беспородных крыс массой 300-400 гр., ишемию моделировали по Селье, реперфузию проводили через 2.5 часа, пробы миокарда отбирали из зоны ишемии (передняя стенка ЛЖ), межжелудочковой пе- регородки и задней стенки ЛЖ через 2, 3, 3.5 и 4 часа и выделяли РНК. Экспрессию мРНК iNOS оценивали методом ОТ-ПЦР. Срезы миокарда окрашивали гематоксилином-эозином и оценивали объемную плотность немиоцитарных клеток в разных зонах миокарда ЛЖ. Результаты: Экспрессия мРНК iNOS в миокарде левого желудочка как в модели ише- мии, так и в модели ишемии-реперфузии зависит от времени. В опытах без реперфузии в зоне ишемии экспрессия мРНК iNOS значимо возрастала с 3.5 часов после ишемии, однако в других зонах значимого увеличения экспрессии в ранние сроки не обнаружи- ли. Реперфузия приводила к ускорению появления и расширению зон, экспрессирующих мРНК iNOS: уже через 3 часа обнаружили значимое увеличение экспрессии мРНК в зоне ишемии по сравнению с интактным контролем; в межжелудочковой перегородке и зад- ней стенке экспрессия мРНК iNOS увеличилась через 4 часа. Увеличение содержания мРНК iNOS в удаленных от зоны ишемии областях при реперфузии можно объяснить как распространением провоспалительных цитокинов по восстановленному кровотоку и рецептор-опосредованным нарастанием экспрессии iNOS в клетках миокарда, так и ин- фильтрацией активированными клетками воспаления. Активированные клетки уже име- ют высокий уровень экспрессии мРНК iNOS и поэтому могут быть причиной значимого повышения содержания мРНК в этих образцах миокарда. Для проверки последнего пред- положения было проведено морфологическое исследование образцов миокарда. Увеличе- ние экспрессии мРНК iNOS сопровождается инфильтрацией миокарда клетками воспале- ния. После реперфузии количество немиоцитарных клеток существенно возрастает во всех зонах, преимущественно происходит инфильтрация нейтрофилами, чего не наблюдали в модели необратимой ишемии.