ИСТИНА

Эндотелий – монослой плотно прилегающих друг к другу эндотелиоцитов, выстилает внутреннюю поверхность всех сосудов организма и функционирует как селективный барьер между циркулирующей в сосудах кровью и тканевой жидкостью тех органов, в которых сосуды расположены. Эндотелиальный барьер динамичен и чувствителен к воздействию различных стимулов, при этом основная роль в осуществлении барьерной функции принадлежит эндотелиальному цитоскелету. Изменение его архитектуры при воздействиях, разрушающих целостность барьера, приводит к сжатию эндотелиоцитов, разрушению межклеточных контактов, и – как следствие – к повышению сосудистой проницаемости. Вещества, усиливающие эндотелиальный барьер, напротив, препятствуют описанным изменениям. В настоящей работе мы использовали монослой эндотелиоцитов вены человека (культура клеток EA.hy926) для анализа и количественной оценки изменений цитоскелета, происходящих при формировании межклеточных контактов, от момента распластывания одиночных клеток и образования первых межклеточных контактов эндотелиоцитов с соседними клетками до формирования конфлуэнтного монослоя. В клетках эндотелия линии EA.hy926 экспрессируются две немышечные изоформы актина – β- и γ-цитоплазматические актины, которые формируют два типа структур: организованные параллельно субстрату пучки стресс-фибрилл, состоящие из β-актина, а также хорошо развитую актиновую сеть, сформированную в основном γ-актином. Количественный анализ показал, что на всех стадиях формирования монослоя эндотелиоцитов интенсивность флуоресценции β-актина была значительно выше в районе контактов клетки с соседними клетками по сравнению с областью ее свободной ламеллы. Вместе с тем, γ-актиновая сеть была наиболее развитой в области ламеллы свободного края одиночных клеток. По мере формирования первых контактов эндотелиоцитов с соседними клетками интенсивность флуоресценции на свободном крае значительно падает, и в клетках, окружённых соседними, γ-актин в краевых зонах распределён более равномерно. Исследование изменений, которые претерпевает система микротрубочек, показало, что по мере формирования эндотелиального монослоя количество микротрубочек на краю клетки постепенно увеличивалось, однако количество микротрубочек в области сформированных контактов эндотелиоцитов всегда превышало их количество в свободной ламелле. Проведенный анализ вовлеченности β- и γ-изоформ актина в реорганизацию цитоскелета эндотелиоцитов показал, что обе системы немышечного актина подвержены значительным, но не однотипным изменениям. Полученные в работе данные позволяют предполагать, что обе актиновые системы, γ-актиновая сеть и β-актиновые фибриллы, специфически организованные в эндотелиоцитах, активно вовлечены в этот процесс, возможно, благодаря существующей (но на настоящей момент не исследованной) механической связи с микротрубочками. Мы предполагаем, что возможные взаимодействия микротрубочек с актиновыми структурами, сформированными γ- и β- изоформами актина, могут играть разные роли в процессе формирования монослоя эндотелиоцитов, отражая разную роль актиновых изоформ и их взаимодействия с микротрубочками в формировании и поддержании эндотелиального барьера.