ИСТИНА

Проблема ВИЧ инфекции остаётся крайне актуальной и в России, и в мире. Одним из способов борьбы с инфекцией является генетическая модификация поверхностных рецепторов (в частности, рецепторов хемокинов), снижающая эффективность проникновения вируса в клетку. В настоящее время в мире проводятся клинические испытания нескольких препаратов для создания делеции в гене CCR5 (создание гомозиготы по аллелю CCR5delta32) с оценкой эффективности и безопасности для человека различных технологий редактирования генома Т-клеток (или гемопоэтических стволовых клеток) ex vivo. Однако кроме редактирования гена CCR5 в Т-клетках (для блокирования развития СПИД у ВИЧ-инфицированных пациентов), возможна постановка задачи по редактированию данного локуса у эмбриона на стадии планирования беременности. Такой подход может являться элементом существующего комплекса технологий экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). В России около 1,5% ВИЧ-инфицированных — это дети, рожденные от матерей с ВИЧ. При этом в случае высокой вирусной нагрузки вследствие плохого ответа беременной на антиретровирусную терапию вероятность передачи вируса ребёнку значительно возрастает. Инъекция компонентов CRISPR/Cas9 в зиготу позволяет модифицировать геном во всех клетках организма, приводя к возможности передачи отредактированного генома последующим поколениям. Внесение делеции, аналогичной присутствующему в популяции «естественному» аллелю CCR5delta32, потенциально позволит обезопасить плод от заражения ВИЧ в процессе внутриутробного развития, а также при родах. Побочным положительным вторичным эффектом будет пожизненная невосприимчивость человека к ВИЧ-инфекции. В такой постановке редактирование CCR5 на стадии оплодотворения представляет собой радикальный способ защиты от ВИЧ. В данном исследовании для редактирования генома использовали донорские ооциты с анормальным числом пронуклеусов, непригодные для дальнейшего использования в программах ВРТ и донорскую сперму (биоматериал был собран с соблюдением процедуры информированного согласия доноров). Доноры были проверены на отсутствие варианта CCR5delta32. Разработанной нами системой CRISPR/Cas9 для внесения делеции CCR5delta32 были инъецированы 10 зигот в S-фазе. После инъекции зиготы помещали в среду для культивирования эмбрионов Blastocyst Medium (COOK), и культивировали в течение 6 дней в CO2 инкубаторе до стадии бластоцисты (примерно 250 клеток). Из 10 инъецированных препаратом CRISPR/Cas9 эмбрионов до стадии бластоцисты нормально развивались 3. Все три полученных эмбриона были проанализированы методом ПЦР «в реальном времени» на наличие вносимой мутации. Два эмбриона показали 100% гомозиготу по делеции. Один эмбрион показал наличие мозаицизма с соотношением около 20% исходного генотипа на 80% CCR5delta32.