ИСТИНА

Термолинзовая (ТЛС) и оптоакустическая спектроскопия применены в варианте измерения спектров (с разрешением 1 нм в видимой и ближней ИК области), а также в режиме пространственного сканирования с субмикронным разрешением на разных длинах волн для определения белков в водных растворах и гемоглобина в индивидуальных эритроцитах. Предложены условия термолинзового определения гемоглобина в плазме крови и цитохрома с без предварительного концентрирования. Предел обнаружения — 10 мкг/мл, относительное стандартное отклонение в диапазоне концентраций 10–50 мкг/мл не превышает 0.1, объем измеряемого раствора 100 фл. Импульсное облучение приводит к локальному перегреву жидкости вокруг крупных белковых молекул, что вызывает дополнительный рост чувствительности ТЛС на полпорядка. Абсолютный предел обнаружения составляет 0.1 пг для энергии 0.5 мДж и 10 пг для энергии 5 мкДж. Стационарный и времяразрешенный сигнал в ТЛС — т.е. сигналы, характеризующие тепловое равновесие и скорость развития теплового профиля, соответственно — определяются теплофизическими характеристиками среды и ее дисперсностью. Растворы геминовых белков ведут себя как дисперсные системы: стационарный сигнал ниже, чем в истинных растворах, а скорость развития — выше. При этом при увеличении ионной силы стационарный сигнал растет, а скорость развития падает в достаточно хорошем согласии с существующими представлении о распаде глобул гемоглобина на субъединицы, которые меньше влияют на суммарные теплофизические свойства растворов по сравнениями с глобулами гемоглобина. Предложена методика термолинзового определения комплекса цитохрома c с фосфолипидами как основными компонентами клеточной мембраны. При спектрофотометрических измерениях невозможно надежное определение при концентрациях цитохрома c ниже 10 мкМ. Предел обнаружения цитохрома с для ТЛС составляет 10–7 М. Измерения растворов цитохрома с с кардиолипином показали снижение сигнала при 514.5 нм с увеличением концентрации кардиолипина и выход на стационарное положение при соотношении цитохром: кардиолипин 1 : 30. Рассчитана константа молекулярной растворимости комплексного соединения цитохром c–кардиодипин, которая составила 3×10–5 M. На модели мышей с нормальной (nu/nu) и с генетически модифицированной кровью (STOCK Hbatm1Paz Hbbtm1Tow Tg(HBA-HBBs)41Paz/J) показано значимое различие в концентрациях гемоглобина в нормальных эритроцитах и характерных для крови больных серповидной клеточной анемией. Кроме того, показано различное его распределение и разная пороговая устойчивость нормальных и серповидных эритроцитов к действию низкоэнергетического импульсного лазерного излучения.