ИСТИНА

Данная работа посвящена исследованию функциональной активности обратной транскриптазы теломеразы термотолерантных дрожжей Hansenula Polymorpha. Основной проблемой в исследовании белковых компонентов теломеразного комплекса является их нестабильность и, как следствие, невозможность выделения. Известно, что белки термостабильных организмов обычно более структурированы, чем их нетермостабильные аналоги. В связи с этим в качестве объекта исследования нами были выбраны термотолерантные дрожжи Hansenula Polymorpha. В рамках данной работы была выделена и очищена каталитическая субъединица теломеразы дрожжей Hansenula Polymorpha. Каталитическая субъединица теломеразы этих дрожжей оказалась более стабильной и растворимой, что позволяет провести исследования ее функциональных свойств. С целью проверки активности в системе in vitro были проведены эксперименты с РНК-ДНК дуплексом, моделирующим взаимодействие матричного участка теломеразной РНК с теломер-подобной ДНК. Реакции проводились в присутствии ионов различных металлов. Впервые была детектирована теломеразная активность in vitro в системе, собранной из очищенных компонентов. Получена теломеразная обратная транскриптаза с заменой аспарагиновой кислоты на аланин в активном центре. По литературным данным, эта мутация в значительной степени снижает полимеризующую активность белка, что позволяет использовать его в качестве отрицательного контроля при тестировании активности каталитической субъединицы теломеразы in vitro.