ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Болезнь Паркинсона (БП) – хроническое НДЗ, при котором происходит дегенерация дофаминергических (ДА-ергических) нейронов нигростриарной системы, тела которых раположены в черной субстанции (ЧС), аксоны проецируются в область стриатума. Первые клинические симптомы нарушения моторного поведения при БП возникают достаточно поздно, только после потери «порогового» числа нейронов: 50-60 % нейронов ЧС и 70-80% аксонов этих нейронов в стриатуме [1]. Снижение дофамина (ДА) в последнем достигает 70-80% [2]. Проблемой для экспериментальных исследований патогенеза БП является невозможность забора материала от пациентов. Известны модели БП in vivo и in vitro. Наиболее приближенными к процессам человеческих клеток являются модели патологии in vivo на животных с использованием различных нейротоксинов. Из их числа наибольший успех имеют модели на мышах линии С57BL/6 с введением нейротоксина МФТП из-за более высокой чувствительности к действию предшественника токсина [3]. До сих пор попытки создания хронической модели паркинсонизма на мышах приводили либо к не полному соответствию признаков БП у людей, либо не носили комплексного характера. Цель данного исследования – создание и комплексная характеристика хронической модели ранней симптомной стадии паркинсонизма у мышей. В работе использовались 2-2,5-месячные мыши линии С57BL/6 со средним весом 22-26 г. Экспериментальной группе 1 раз в 7 дней в течение 10 недель вводили МФТП («Sigma») в дозе 12 мг/кг s.c., группе контроля – аналогично 0,9% NaCl. Через неделю после последней инъекции МФТП измеряли моторное поведение в тесте «открытое поле» («TSE systems»). Для иммуноцитохимического выявления числа тирозингидроксилазопозитивных (ТГ+) нейронов в ЧС и терминалей аксонов (ТГ – маркер ДА-ергических нейронов) использовали одну половину мозга, который предварительно разрезали по средней саггитальной линии. Вторую половинку использовали для определения содержания катехоламинов методом ВЭЖХ с ЭД в моторной коре, ЧС, стриатуме, обонятельных луковицах и стволе. Результаты и их обсуждение. В экспериментальной группе по сравнению с группой контроля были выявлены двигательные нарушения (снижение пройденного пути с 989±57 до 756±51 см, длины шага с 5,2±2 до 4,3±2), которые подтвердили развитие симптоматического паркинсонизма на наших моделях. Иммуногистохимия показала снижение количества ТГ-иммунореактивных терминалей аксонов до 75%. Это свидетельствует о развитии ранней стадии симптоматического паркинсонизма. У человека при БП на ранней симптомной стадии происходит аналогичное снижение. Уровень ДА в стриатуме при этом у человека также снижается, по разным данным, на 70-80%, на наших моделях – на 78% у опытной группы. Кроме того, на модели было выявлено достоверное повышение (р<0.05) обмена ДА по индексу отношения медиатора к метаболиту: ДОФУК/ДА и ГВК/ДА. Количество ТГ-иммунореактивных нейронов в ЧС при этом на модели не изменялось, у людей происходит снижение на 45-59%. В опытной группе в ЧС уровень ДА достоверно снижался до … (– 29%), в то время как в других областях уровень его не изменялся. В ЧС было выявлено достоверное повышение (р<0.05) обмена ДА по индексу отношения медиатора к метаболиту 3-МТ/ДА. Падение концентрации ДА в тканях стриатума доказывает тот факт, что моторные нарушения появились в результате тотальной декомпенсации функции деградировавших нейронов. Отличительной особенностью работы является то обстоятельство, что токсин применяется по наименее интенсивной схеме, без использования адъюванта, как это принято в мире [4]. Выводы. Хроническая модель ранней симптомной стадии паркинсонизма у мышей, разработанная в нашей лаборатории, коррелирует с таковыми изменениями у людей, может способствовать более глубокому пониманию механизмов патогенеза, ранней диагностики и поиску, разработке лекарственных средств с нейропротекторными свойствами. Литература. 1. P. Genner (ed.) A molecular biology approach to Parkinson’s disease. Changes at the molecular level in parkinsonism. IOS press. 2000. P. 61-84 2. Kish S.J., Shannak K., Rajput A. et al. Aging Produces a Specific Pattern of Striatal Dopamine Loss: Implications for the Etiology of Idiopathic Parkinson's Disease.// J. of Neurochem. 1992. p. 642-648. 3. Малиновская Н.А., Морозова Г.А., Кувачева Н.В. и др. Модели болезни Паркинсона in vitro.// Научный аспект. 2012. № 4. 228 с. 4. Alvarez-Fischer, D., et al. Probenecid potentiates MPTP/MPP+ toxicity by interference with cellular energy metabolism.// J. Neurochem. 2013. 127(6): p. 782-92.