ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) заражены более 35 миллионов человек по всему миру. В геноме ВИЧ-1, кроме структурных и регуляторных генов, закодированы также гены вспомогательных белков Vif, Vpr, Vpu и Nef. Основной функцией вспомогательных белков ВИЧ-1 считается противодействие клеточным механизмам защиты от вирусов. Клеточный белок BST2 известен как фактор рестрикции ВИЧ-1 с 2008 года. BST-2 обладает уникальной структурой: два мембран-ассоциированных домена определяют способность белка удерживать вирусные частицы у мембраны и связывать их друг с другом. Открытым остается вопрос о роли BST-2 в межклеточной передаче ВИЧ. На данный момент имеется несколько противоречащих друг данных – как о ингибирующем влиянии BST-2 на межклеточную инфекцию, так и напротив, о способности BST2 стимулировать межклеточную инфекцию. Мы получили конструкции, экспрессирующие вирусные частицы с мутациями в вспомогательных генах ВИЧ-1. Далее, с помощью разработанных ранее репортерных векторов на основе люциферазы, мы определяли вклад каждого из вспомогательных белков в репликацию ВИЧ-1. Инфекционные тесты проводились на нелимфоидных и лимфоидных линиях клеток, а также в условиях межклеточной трансмиссии в сравнении с инфекцией свободным вирусом. Делеция в гене vpu вдвое снижала репликацию дефектного вируса при инфицировании свободными частицами, тогда как при совместном культивировании клеток-продуцентов с клетками-мишенями, т.е. при межклеточной передаче, Vpu-дефектный вирус реплицировался в 1.5 раза эффективнее по сравнению с вирусом без мутации. Далее, мы получили клеточные линии с нокаутом по гену bst2 с помощью технологии редактирования генома CRISPR-Cas9. Оказалось, что в нокаутных по BST2 клетках Vpu-дефектный и вирус без мутаций реплицируются на одном уровне. При восстановлении экспрессии BST2 наблюдалось повышение репликации Vpu-дефектного вируса по сравнению с контролем, что свидетельствует о вкладе BST2 в межклеточную инфекцию: в отсутствии Vpu клеточный фактор BST2 удерживает частицы у поверхности клетки, способствуя более успешной инфекции при межклеточных контактах. Итак, ВИЧ-1 способен эксплуатировать механизм межклеточной передачи с целью борьбы с клеточной защитой, в частности, BST2-опосредованной рестрикцией.