ИСТИНА

Существуют две гипотезы возникновения хромосомных транслокаций, рассматривающие трехмерную структуру хроматина как важный фактор, определяющий предрасположенность локусов к перестройкам. Согласно первой, транслокации появляются вследствие неправильной репарации двуцепочечных разрывов, возникших в близко локализованных участках генома («первичность контакта»). Вторая предполагает возникновение разрывов в пространственно удаленных последовательностях генома и способность концов фрагментированной ДНК перемещаться в пространстве ядра, что может приводить к их негомологичному соединению («первичность разрыва»). Нами было показано, что после индукции этопозидом (ингибитор ДНК-топоизомеразы II) двуцепоченых разрывов внутри генов AML1 и MLL за пределами территорий хромосом, в которых лежат эти гены, чаще локализуются концы разрывов, а не интактные аллели данных генов. На культуре лимфоидных клеток Jurkat человека мы провели 4C-анализ для поиска пространственно сближенных локусов с генами AML1 (RUNX1) и MLL, транслокации с участием которых часто наблюдаются при лейкозах. Также мы провели 3D-FISH до и после обработки клеток этопозидом с использованием флуоресцентных зондов разных цветов к концам гена AML1 и против территории 8 хромосомы, где локализован частый партнер по транслокациям гена AML1 - ген ETO, и последующим анализом конфокальных изображений компьютерной программой. 4C-анализ не выявил предпочтительной колокализации генов AML1 и MLL с их партнерами по транслокациям ни до, ни после обработки этопозидом. Результаты 3D- FISH показали, что после обработки клеток этопозидом внутри последовательности гена AML1 иногда образуется двуцепочечный разрыв. Однако обработка этопозидом не приводит к уменьшению расстояния между разорванными и неразорванными аллелями гена AML1 и территорией восьмой хромосомы по сравнению с контролем. При наблюдении за большим числом клеток не удается выявить тенденций к пространственному сближению протоонкогенов AML1 и MLL с их генами-партнерами по транслокациям, что может свидетельствовать в пользу гипотезы о первичности разрыва. Наблюдения за динамикой фрагментов протоонкогена AML1 после внесения индуцированных этопозидом двуцепочечных разрывов не позволяют заключить, что миграция фрагментов идет специфично в направлении хромосомной территории, где локализован частый партнер гена AML1 по транслокации - ген ETO.