ИСТИНА

Введение:  Применение мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани (МСК ЖТ) в регенеративной медицине основано на их способности к дифференцировке и высокой паракринной активности. Перспективно использование вместо суспензии ассоциатов клеток, простейшим видом которых являются клеточные пласты (англ. cell sheets) - клетки в несколько слоев образуют тонкий, но достаточно плотный для манипуляций материал. Работа посвящена характеристике регенеративного потенциала клеточных пластов из МСК ЖТ с оценкой их паракринной активности и структуры. Цель: Разработка эффективного метода получения и изучение регенеративных свойств МСК ЖТ в составе клеточных пластов. Материалы и методы. МСК ЖТ человека были выделены протеолитическим способом. Для получения клеточных пластов использованы 2 подхода: высадка в суспензии высокой плотности или длительное культивирование с медленной наработкой матрикса. Материалом для исследования паракринной активность являлась кондиционированная 2-7 суток бессывороточная среда, в которой методом ИФА определяли концентрацию ростовых факторов. Гистологическая оценка проводилась на замороженных препаратах окраской гематоксилином/эозином и на маркеры пролиферации и апоптоза клеток. Результаты: Полученные нами результаты указывают на возможность получения клеточных пластов из МСК ЖТ как в течение 48-72 ч при использовании высокой плотности клеточной суспензии, так и при длительном культивировании клеток. Важным оказалось, что «снятие» клеточных пластов удавалось выполнить с помощью “рутинных” реактивов вместо применения дорогостоящего термочувствительного пластика. Толщина клеточных пластов определена около 50-70 мкм, в их составе имелись клетки с признаками пролиферации. Характеристика паракринной активности показала, что кондиционированные среды, собранные с конструкций, содержат значимые количества ангиогенных факторов роста: VEGF165, HGF, ангиопоэтина-1 - что указывает на сохранение паракринной функции клеток при переводе их в тканеинженерную конструкцию. Выводы: 1. Разработанный способ получения клеточных пластов позволяет генерировать и снимать клеточные пласты с культурального пластика без использования термочувствительных полимеров. 2. Клеточные пласты из МСК ЖТ имеют толщину в 50-70 мкм и состоят из жизнеспособных пролиферирующих клеток. 3. Паракринная активность МСК ЖТ в составе клеточных пластов сопоставима с таковой у обычных культур МСК ЖТ, что указывает на их функциональную сохранность. Разработанные подходы могут стать основой для новых терапевтических технологий в кардиологии, эстетической медицине, сосудистой хирургии.