ИСТИНА

Пигментный эпителий сетчатки (РПЭ) - монослой клеток, расположенный между фоторецепторами и сосудами глаза, выполняющий жизненно-важную физиологическую функцию в сетчатке. В норме клетки РПЭ не пролиферируют, неподвижны и соединены друг с другом плотными контактами. В случае патологии, клетки РПЭ входят в клеточный цикл, меняют морфологию и приобретают подвижность. Это ведёт к нарушению структуры сетчатки и является причиной множества офтальмологических заболеваний. Культивирование клеток РПЭ даёт возможность изучать эти патологические процессы. Известно, что клетки РПЭ способны дифференцироваться в мезенхимо- и нейроноподобные клетки. Целью исследования было изучение действия bFGF (регулятора нейральной дифференцировки) на пролиферацию и пластичность клеток ARPE 19 (линейная культура РПЭ человека). В эксперименте использовали клетки 3-4 пассажа. Количество сыворотки в среде понижали до 1% и в среду добавляли bFGF (20 нг/мл). Клетки инкубировали 24, 48 и 72 часа. Через 24 часа после воздействия клетки изменяли морфологию и форму колоний. Через 48 часов клетки приобретали эпителиальную морфологию, распластывались и выглядели более округлыми, по сравнению с вытянутыми клетками в контроле. Через 72 часа в культуре появлялись нейроноподобные клетки. Визуально отмечен более высокий уровень пролиферации. Оценку пролиферации проводили на разных концентрациях клеток 8*104 кл/см2 , 4*104 кл/см2 , 2*104 кл/см2 , 1*104 кл/см2 , 0,5*104 кл/см2 , применяя МТТ-тест. bFGF увеличивал пролиферацию ARPE 19 при низкой концентрации клеток. Нейральные маркеры оценивалась иммуногистохимически и методом Real-time PCR. Иммуногистохимическими методами не выявлено значимого увеличения клеток с β - Tubulin III, в то время, как Connexin 43 экспрессировался постоянно на высоком уровне.44 Более детальная характеристика экпрессируемых генов была осуществлена методом Real-time PCR. Были исследованы гены-маркеры РПЭ и нейральной дифференцировки. Исследование показало снижение экспрессии генов-маркеров РПЭ, но не обнаружило усиление нейральной дифференцировки. Таким образом, bFGF усиливает пролиферацию, но не оказывает значимого нейрализующего воздействия на клетки ARPE 19. Работа поддержана грантом РФФИ 14-04-00604