![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Митохондриальный Комплекс I и гомологичные NADH:хинон-редуктазы 1 типа (NDH-1) бактерий катализируют окисле-ние NADH хинонами, сопряженное с векторной транслокацией 4 протонов через сопрягающую мембрану. Комплекс I содер-жит прочно связанный FMN, 7-8 железо-серных кластеров и связанный хинон. Механизм сопряжения транспорта электронов и векторной транслокации протонов неизвестен и является одной из главных нерешенных проблем современной биоэнерге-тики. Стехиометрия суммарной реакции NADH + H+ + Q + 4H+in <-> NAD+ + QH2 + 4H+out иcключает транслокацию протонов единственной петлей Митчела. Все опубликованные гипотетические модели рассматривают перенос электронов от железо-серного кластера N2 хинон как наиболее вероятное «место» сопряжения. Недавно мы показали ATP-зависимый сукцинат-поддерживаемый обратный перенос электронов на искусственный акцептор электронов гексаамминорутений (III) (HAR) Ком-плексом I в составе субмитохондриальных частиц (СМЧ) сердца быка. Оказалось, что этот путь нечувствителен к ингибиро-ванию NADH-связывающего центра фермента специфическим ингибитором – NADH-OH. Ранее мы показали, что NADH:HAR-редуктазная активность митохондриального, но не прокариотического (P.denitrificans), фермента аллостерически стимулируется ATP. Разумно было подтвердить или опровергнуть феномен нечувствительного к NADH-OH ATP-зависимого сукцинат-поддерживаемого восстановления HAR на NDH-1 в составе вывернутых плазматических везикул P. denitrificans (СБЧ), т.к. для этого препарата отсутствуют аллостерические эффекты ATP. В настоящей работе мы показали, что 1) NADH:HAR-редуктазные активности СМЧ и СБЧ характеризуются различающейся немихаэлисовской кинетикой, которую можно объяснить существованием двух различных центров и/или механизмов восстановления этого акцептора. 2) Комплекс I и NDH-1 отличаются по параметрам взаимодействия NADH-связывающего центра с NADH-OH. 3) Блокирование NADH-связывающего центра NDH-1 этим ингибитором не препятствует энергозависимому восстановлению HAR. Таким образом, предложенная нами модель обратного переноса электронов от QH2 на HAR экспериментально подтверждена для первого пункта сопряжения дыхательной цепи прокариот.