ИСТИНА

В настоящее время в медицинской науке наблюдается устойчивый тренд перехода от макроскопического уровня изучения заболевания к изучению его молекулярных механизмов. В связи с этим одним из наиболее перспективных объектов для изучения различных патологий являются клеточные культуры первичных и линейных клеток. Они позволяют моделировать различные заболевания и способствуют поиску новых способов их терапии. Культуры клеток могут быть использованы "как есть" или же, для расширения возможностей их применения, могут быть временно или перманентно модифицированы с использованием технологий siRNA, ZFNs, TALENs или CRISPR/Cas9. Атеросклероз является актуальной проблемой современного общества. Существуют литературные данные о том, что одной из молекул, принимающих участие в развитии атеросклероза и других метаболических нарушений, является поверхностный GPI-заякоренный белок Т-кадгерин. [n1, n2] Однако, его роль в развитии метаболических нарушений, молекулярные механизмы этих нарушений и способы их возможной коррекции остаются неясными. Для определения его вклада в формирование патологического сигнала при стимуляции клеток липопротеидами низкой плотности на основе линии клеток HeLa была создана популяция клеток, характеризующаяся низким уровнем экспрессии T-кадгерина. Для получения данной популяции клеток использовали технологию CRISPR/Cas9. [n3] Был сформирован дизайн вектора, получена эффективно действующая конструкция и разработан уникальный протокол последовательной трансфекции клеток. В результате, можно утверждать, что все аллели в отобранных клонах были изменены (данные сиквенса в прикрепленных файлах). Эффективность модифицирования на каждом из 3 этапов трансфекции составила 50%. Таким образом, была получена популяция клеток со сниженной на 87% экспрессией Т-кадгерина. В качестве отдельного результата хотелось бы выделить, что проведенное исследование позволяет применять отработанную систему редактирования генома в клеточной и генной терапии в будущем. Изученная технология становится эффективным инструментом для работы с клеточными линиями при исследовании молекулярных механизмов разнообразных заболеваний.