ИСТИНА

Динамичные микротрубочки (МТ) играют важную роль в клеточной миграции, поддерживая поляризацию и направленность движения клеток. Предполагается, что динамичные МТ могут напрямую регулировать динамику фокальных контактов. В эксперименте были проанализированы параметры МТ и фокальных контактов (ФК) в процессе распластывания (с момента прикрепления и в последующие 60 минут) в норме и при подавлении динамической нестабильности МТ сочетанным воздействием 100 нМ нокодазола и 50 нМ таксола. Кинетика распластывания фибробластов 3Т3 описывается нелинейно, включая быструю и медленную фазы. Под воздействием ингибиторов МТ кинетика распластывания приобретает линейную зависимость (исчезает фаза быстрого распластывания). Средняя скорость роста плюс-концов МТ (маркерный белок – EB3) в быстрой фазе распластывания составляет – 34.0±1.40 мкм/мин и 48.0±2.77 мкм/мин в медленной фазе распластывания. Средняя длина трека МТ в быстрой фазе распластывания – 4.02±0.21 мкм, в медленной – 5.05±0.33 мкм. Под воздействием ингибиторов средняя длина треков составляет 2.17±0.23 и 2.24±0.22 мкм в начале и условном конце фазы распластывания соответственно (конец распластывания совпадает с окончанием съемки и составляет 60 минут). Средние скорости роста плюс-концов МТ составляют в начале и конце распластывания 16.37±1.15 и 20.67±2.13 мкм/мин соответственно. Таким образом, подавление динамической нестабильности МТ приводит к уменьшению продолжительности фазы роста и скорость роста плюс-концов МТ. Фокальные контакты (ФК) (маркерный белок – винкулин) в распластывающихся фибробластах 3Т3 динамичны (возникают, растут, уменьшаются и исчезают). ФК были разделены по максимальной площади на мелкие ФК (площадь менее 3 мкм2 ) и крупные ФК с площадью 3 и больше мкм2 . Площадь крупных ФК всегда больше площади мелких ФК (в 2.3 раза в момент появления, р=0.0006; в 2 раза в момент исчезновения, р<0.0001). Среднее время жизни крупных и мелких ФК (24.42±3.48 минут и 19.85±1.95 минут соответственно) статистически не отличается. Продолжительности стадий сборки, стабильного существования и разборки крупных и мелких ФК статистически не отличаются. Максимальное значение интегральной яркость флуоресценции (отражает количество винкулина) соответствует временной точке максимальной площади ФК: как крупные, так и мелкие ФК в момент образования имеют большую площадь и яркость, чем в момент исчезновения. Крупные ФК являются всегда более яркими, чем мелкие ФК. Плотность молекул винкулина в ФК (измерена по средней яркости флуоресценции) минимальна в точке с максимальной площадью, и всегда больше в момент исчезновения, чем в момент появления. При этом плотность мелких ФК всегда больше, чем плотность крупных ФК. Под воздействием 100 нМ нокодазола и 50 нМ таксола также также выделяются 2 группы ФК по площади (мелкие и крупные). В присутствии ингибиторов МТ уменьшается продолжительность стадии стабильного существования как мелких, так и крупных контактов. Таким образом, динамичные МТ главным образом участвуют в формировании фазы быстрого распластывания и, возможно, задействованы в поддержании стадии стабильного существования ФК.