ИСТИНА

При культивировании эмбрионов in vitro изменение основных характеристик культуральной среды влияет на морфофункциональное состояние зародышей. Ранее нами была продемонстрирована реорганизация актинового компонента ядер двуклеточных зародышей мыши при повышении кислотности среды, мы также располагаем предварительными данными о влиянии гипотонического стресса на распределение актина в ядрах зародышей этого возраста. В данной работе были сопоставлены изменения ядерной локализации мономерного и фибриллярного актина у двуклеточных зародышей мыши, вызванные влиянием двух названных выше факторов, различающихся по своей природе и механизму действия. Анализ ядерной локализации мономерного актина, меченного конъюгатом Alexa Fluor 488-ДНКаза I, показал, что при повышении pH с 7.2 до 7.8 единиц, яркость свечения ядер зародышей существенно возрастает, а точечный характер мечения нуклеоплазмы, типичный для контрольных эмбрионов, меняется на ее равномерное бесструктурное свечение. В гипотонической среде у зародышей с увеличенным объемом бластомеров (инкубация в среде 10 мин) наблюдается очень слабое свечение меченого мономерного актина в зонах локализации ядер. Однако позднее, когда объем бластомеров заметно уменьшается (инкубация в среде 30 мин), мономерный актин отчетливо визуализируется в нуклеоплазме, хотя картина его распределения по-прежнему отличается от нормы. После культивирования в среде с рН 7.8 флуоресценция распознаваемого TRITC-фаллоидином актина наблюдалась в нуклеоплазме ядер зародышей и отсутствовала в местах расположения проядрышек. Ядра гипотонированных эмбрионов с увеличенным объемом бластомеров демонстрировали такой же характер ядерной локализации актина. Данная картина принципиально отличалась от наблюдавшейся у контрольных эмбрионов, где флуоресцентный сигнал от F-актина в зонах расположения ядер не детектировался. У зародышей, форма и объем бластомеров которых начали восстанавливаться, наблюдали гетерогенный характер мечения ядер. Отдельные эмбрионы демонстрировали такой же рисунок мечения, как и зародыши с увеличенным объемом бластомеров, однако у большинства свечение меченого фаллоидином актина в нуклеоплазме было значительно слабее. Таким образом, на основании имеющихся данных можно предположить, что изменение характера ядерной локализации мономерного актина зависит от природы вызвавшего его фактора и, возможно, связано с различиями в динамике ядерного импорта и/или экспорта мономерного актина у зародышей, находящихся под воздействием разных факторов. Напротив, появление в ядрах актина, распознаваемого TRITC-фаллоидином, индуцируется как повышением кислотности культуральной среды, так и снижением ее осмотичности, то есть, как минимум, для двух данных факторов имеет неспецифический характер.