ИСТИНА

Метод поляризации флуоресценции нашел широкое применение для изучения связывания флуоресцентно-меченных соединений с макромолекулами. Суть данного подхода заключается в том, что измеряемый уровень поляризации флуоресценции пропорционален доли связанного с макромолекулой флуоресцентного производного. Ранее [1,2] с использованием BODIPY-меченного эритромицина этим методом были определены константы диссоциации комплексов ряда производных эритромицина с 50S субъединицами рибосом E. coli. Однако существуют некоторые ограничения этого метода, касающиеся исследования лигандов, обладающих более высокой аффинностью по сравнению с флуоресцентно-меченными. Производные макролидных антибиотиков, относящиеся к ряду тилозина, как правило, проявляют более высокое сродство к бактериальным рибосомам, чем производные эритромицина. Целью данной работы было разработать методику для определения констант диссоциации комплексов производных ряда тилозина с рибосомами E. coli. В рамках работы были получены производные тилозина, десмикозина и 5-О-микаминозилтилонолида (ОМТ), содержащие флуоресцентные остатки родамина, флуоресцеина, Alexa Fluor, BODIPY FL и нитробензоксадиазола (NBD), а также BODIPY FL С5-производное эритромицина. Было изучено связывание синтезированных соединений с рибосомами E. coli путем измерения зависимости поляризации флуоресценции от концентрации рибосом при постоянной концентрации флуоресцентного производного. На основе полученных данных были рассчитаны кажущиеся константы диссоциации (KD) комплексов рибосомы с флуоресцентными производными макролидов в предположении о равновесном специфическом связывании субстрата с лигандом. Связывание новых синтетических производных макролидов с бактериальными рибосомами изучалось по вытеснению флуоресцентно-меченных производных эритромицина и тилозина из их комплексов с рибосомами E. сoli. Для производных ОМТ было показано, что KD, полученные методом поляризации флуоресценции, изменяются в том же ряду, что и ранее определенные значения ингибирующей активности, которую те же соединения проявляли в бесклеточной системе биосинтеза белка. В дальнейшем этот подход может быть использован для высокоэффективного скрининга производных макролидов.