![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Механизм транскрипции хроматина РНК-полимеразой II (РНКП) представляет собой консервативный процесс для всех эукариот, характеризующийся строго упорядоченной регулируемой последовательностью нарушений и восстановлений ДНК-гистоновых и гистон-гистоновых взаимодействий. Нарушения процессов ДНК-гистоновых и гистон-гистоновых взаимодействий и необратимая потеря нуклеосом в результате действия различных факторов способны запускать патологические процессы и снижать жизнеспособность клеток, приводя, в частности, к блокировке процессов транскрипции. Помимо блокировки транскрипции в естественных условиях из-за нарушений структуры хроматина, существует и направленная блокировка в ходе терапии некоторых заболеваний, связанных с нарушениями пролиферативных процессов в клетках. В связи с этим изучение и понимание деталей процесса и механизмов транскрипции хроматина, где комплекс РНКП с нуклеосомой выступает в качестве мишени для новых лекарств, представляет собой актуальную задачу как с фундаментальной, так и с практической точки зрения. В нашей работе методами ПЭМ негативного контрастирования исследовались формы элонгационного комплекса (ЭК) +24, образующиеся в ходе транскрипции нуклеосомной ДНК РНК-полимеразой II. В одном случае исследовался ЭК(+24), формирующийся в норме в ходе транскрипции нативной ДНК (без однонитевых разрывов). Во другом случае исследовался ЭК(+24), образующийся в результате спонтанной остановки транскрипции ДНК с однонитевым разрывом в положении (+12) нуклеосом-позиционирующей последовательности (НПП). Трехмерные структуры строились с использованием данных, полученных методами электронной томографии, классической вертикальной съемки и случайного конического наклона (Random conical tilt, RCT,). В разделе приведены результаты (полученные с использованием различных подходов микрофотографии, поперечные срезы томограмм, предварительные реконструкции на основе данных электронной томографии), полученные в ходе исследования ЭК(+24). Полученные трехмерные структуры характеризуются сходной морфологией и состоят из двух соединенных электронных плотностей, соответствующих РНКП E.Coli и нуклеосоме. Анализ полученных структур ЭК(+24) показал, что введение однонитевого разрыва в нетранскрибируемую цепь ДНК (+12) приводит к уменьшению расстояния между нуклеосомой и РНКП, что можт быть связано с обратным замыканием нуклеосомной ДНК на гистоновом октамере.