![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
S.102-103,176-177. В СССР на протяжении ряда лет выпускается и используется в абдоминальной хирургии, стоматологии, травматологии и дру- гих областях медицины текстильные биоматериалы с Трипсином (Тр) иммобилизованным на диальдегидцеллюлозе (ДАЦ) и поликап- роамиде (ПКА). Большинство методов анализа содержания иммоби- лизованного белка на нерастворимом носителе чувствительны к "свободным" альдегидным группам носителя, и при их значитель- ном содержании либо не работают,либо дают очень значительную погрешность определения. Метод Брэндфорда отличается простотой (Anal.Biochem.,1976,v.72,p.248)чувствительностью и хорошей восп- роизводимостью, но он позволяет анализировать белок, находя- щийся в растворе. Для солюбилизации Тр нами были использованы следующие вещества, после двухчасовой инкубации в них при 75 гр.Цельсия: 50% уксусная кислота; 0.1Н. раствор буры (рН-9.2); 0.1Н. p-p HCL (pH-1.1). В качестве контроля использовались со- ответствующие образцы носителей без Тр. Для калибровки ис- пользовались растворы Tp в той среде, в которой проводилась солюбилизация. Полученные результаты сравнивались с данными, полученными методом Лоури-Гартли. Следует отметить, что при использовании 50% уксусной кислоты возникает ряд трудностей, в результате которых метод не работает. После солюбилизации белка в 0,1 Н. растворе буры не требуется дальнейшая нейтра- лизация, но по-видимому из-за значительного автолиза Тр (по- вышенная температура и рН) и др. калибровка по белку нелиней- на и плохо воспроизводится. При использовании соляной кислоты из-за значительной деструкции ПКА невозможно определить со- держание белка, а для ДАЦ не происходит полной солюбилизации Тр.