ИСТИНА

При создании ферментных биосенсоров одним из наиболее важных этапов является иммобилизация ферментов на сенсорные поверхности. Во многом именно способ закрепления биомолекулы на такой поверхности определяет чувствительность и операционную стабильность биосенсора. Среди большого многообразия известных способов иммобилизации ферментов перспективным является метод модификации сенсорной поверхности пленками на основе «умных» полимерных микрогелей, которые способны значительно, быстро и обратимо изменять свои свойства при изменении условий окружающей среды. В частности, в настоящее время значительный интерес вызывают рН- и термочувствительные сополимерные микрогели на основе поли-N-изопропилакриламида, в состав которых входят катионные сомономерные звенья (диметил)аминопропилметакриламида. В заряженном (протонированном) состоянии такие катионные микрогели способны связывать значительные количества противоположно заряженных ферментов, и при этом, будучи высокогидратированными, обеспечивают благоприятное микроокружение для связанных ими биомолекул, способствуя сохранению конформации и биологических функций последних. Данная работа посвящена исследованию формирования покрытий на основе микрогеля из сшитого сополимера N-изопропилакриламида и диметиламинопропилметакриламида (П(НИПАМ-со-ДМАПМА)) и фермента глюкозооксидазы (ГО), а также применению подобных микрогель-ферментных покрытий для количественного определения (анализа) глюкозы. Адсорбция частиц П(НИПАМ-со-ДМАПМА) и дальнейшее связывание ими биомолекул были исследованы методом пьезоэлектрического микровзвешивания с мониторингом диссипации, что позволило выявить оптимальные условия (температура, рН, ионная сила), которые необходимы для осуществления (а) эффективной модификации относительно гидрофобных поверхностей микрогелем (стадия 1) и (б) последующего электростатического связывания глобул фермента микрогелевой пленкой (стадия 2). Выявленные оптимальные условия были использованы для двухстадийного формирования покрытий П(НИПАМ-со-ДМАПМА)/ГО на поверхности планарных графитовых электродов (предварительно модифицированных наночастицами диоксида марганца для придания пероксидчувствительности) и создания на основе таких конструкций амперометрических глюкозных биосенсоров. В рамках работы были определены аналитические характеристики (чувствительность, линейный диапазон, предел определения), а также операционная стабильность полученных электрохимических биосенсорных систем (c. 1210).