ИСТИНА

Целью работы являлось исследование физико-химических и энзиматических свойств рекомбинантного препарата коллагеназы SerP38 T. molitor. Исследуемая рекомбинантная пептидаза SerP38 была синтезирована в экспрессионной системе Komagataella kurtzmanii с последующей очисткой с использованием аффинной хроматографии на Ni-NTA-агарозе. В рамках данной работы были получены данные, характеризующие рН-оптимум и рН-стабильность фермента, проведена сравнительная характеристика его субстратной специфичности, определены кинетические параметры гидролиза хромогенного пептидного субстрата Suc-AAPF-pNA. Активность коллагеназы определяли по начальным скоростям гидролиза хромогенных пептидных субстратов, содержащих остаток п-нитроанилина для детекции. Значение рН-оптимума и интервал рН-стабильности определяли в диапазоне рН 3,0-11,0. Оптимум работы фермента приходится на рН 9, однако при рН выше этого значения падает стабильность фермента. Проведена характеристика специфичности фермента. Было выявлено предпочтение к субстратам Suc-AAPF-pNA и Ac-Y-pNA, что свидетельствует о специфичности коллагеназы по отношению к субстратам, содержащим ароматические аминокислотные остатки. Определены кинетические параметры гидролиза субстрата Suc-AAPF-pNA. Работа поддержана грантом РФФИ № 20-54-56044 Иран_т.