ИСТИНА

Разливы нефти являются одной из главных причин загрязнения почвы, грунтовых вод и морской среды. Сырая нефть в основном состоят из предельных углеводородов, ароматических углеводородов, смол и асфальтенов (Kohno et al., 2002). Данная работа посвящена н-алканам, как главному компоненту сырой нефти. Были взяты пять наборов ПЦР-праймеров для выявления генов, кодирующих алканогидроксилазы, которые являются ключевыми ферментами, катализирующими первую стадию деградации алканов. Штаммы, выделенные из образцов бензина (Bacillus sp. Bi14 MK496220.1, Bacillus pumilus Bi12 MK495272.1, Bacillus safensis Bi13 MK496178.1, Paenobacillus agaridevorans Bi11 MK496175.1) и авиационного керосина (Sphingobacterium multivorum Bi2 MG812313.1, Alcaligenes faecalis Bi3 MG812316.1, Rhodococcus jialingiae Bi4 MG871258.1, Sphingobacterium mizutaii Bi5 MG871469.1, Rhodococcus erythropolis Bi6 MG871403.1, Deinococcus sp. Bi7 MG812379.1, Stenotrophomonas sp Bi8 MG871464.1, Stenotrophomonas maltophilia Bi9 MG812513.1, Rhodococcus sp. Bi10 MG871414.1), выращивали на универсальной среде (Лысак, 2003), затем проводили выделение ДНК с помощью Thermo Scientific MagJET Plant Genomic DNA Kit. Для амплификации генов биодеградации н-алканов, alkB, Cyp153, Alk1, Alk2 и Alk3 были взяты праймеры и программы амплификации, описанные в (Иванова и др., 2014). Установлено, что не все штаммы содержат исследуемые гены. Среди бензиновых штаммов только Paenobacillus agaridevorans Bi11 содержат ген Cyp153, а остальные гены не выявлены ни у одного из этих штаммов. Среди керосиновых штаммов Deinococcus sp. Bi7 так же не содержит ни один из этих генов, остальные штаммы содержат как минимум один из них. Интересно, что ген Alk2 вообще не содержит ни один из выделенных нами штаммов. По 4 гена (исключая Alk2) содержат штаммы Alcaligenes faecalis Bi3, Rhodococcus jialingiae Bi4 и Rhodococcus erythropolis Bi6. Это согласуется с данными, полученными нами при выращивании штаммов на чашках с добавлением различных алканов, где керосиновые штаммы по визуальной оценки характеризовались более интенсивным ростом по сравнению с бензиновыми. А штаммы Rhodococcus jialingiae Bi4 и Rhodococcus erythropolis были использованы для создания разных бинарных ассоциаций как наиболее перспективные с точки зрения биодеградации различных углеводородов, в том числе н-алканов. Однако, бензиновые штаммы оказались более активными по деградации, в проведенных нами экспериментах с помощью ГЖХ, что, по-видимому, связано у них с выработкой различных ПАВов, а не выработкой гидроксилаз. Таким образом, данный метод можно применять для детекции алкан-деградирующих бактерий, но требует подкрепления микробиологическими методами, так как в нашем случае не у всех выделенных углеводород окисляющих штаммов было показано наличие исследуемых генов, однако способность к деградации н-алканов установлена.