ИСТИНА

Мутации в митохондриальной ДНК часто являются причиной тяжелых наследственных заболеваний. Одним из наиболее перспективных генно-терапевтических способов супрессии таких мутаций является импорт нуклеиновых кислот в митохондрии. Среди прочего, был показан импорт ДНК в митохондрии, однако этот процесс характеризуется низкой эффективностью. Мы предположили, что данный процесс можно интенсифицировать при помощи предварительного связывания молекулы нуклеиновой кислоты с ДНК-связывающим белком, импортирующимся в митохондрии. В качестве модельного белка мы выбрали дрожжевой белок митохондриального нуклеоида Abf2p. Мы показали, что Abf2p связывается с двуцепочечной ДНК с константой диссоциации, равной 40 нМ. Таким образом, связывание является достаточно прочным для того, использовать его для увеличения эффективности импорта ДНК в митохондрии. Белок связывается с ДНК в виде мономера, а длина участка связывания на линейной двуцепочечной ДНК составляет 13 пар нуклеотидов. При инкубации рекомбинантного Abf2p с фрагментами ДНК и изолированными дрожжевыми митохондриями нам удалось продемонстрировать, что присутствие этого белка действительно увеличивает эффективность процесса импорта ДНК в митохондрии. Максимальное увеличение эффективности (примерно в 2,5 раза) происходило в ситуации, когда одна молекула Abf2p приходилась на четыре участка его связывания в ДНК. Снижение эффективности импорта при увеличении концентрации белка, вероятно, происходило вследствие критического уменьшения заряда молекулы ДНК и вызываемого этим снижения ее сродства к мембранам митохондрий. Таким образом, мы показали, что применение ДНК-связывающих белков может значимо увеличивать эффективность импорта нуклеиновых кислот в митохондрии. Эти результаты, несомненно, найдут свое применение в разработке новых генно-терапевтических подходов к супрессии мутаций в митохондриальной геноме.