ИСТИНА

Увеличение числа патогенных бактерий с множественной лекарственной устойчивостью вынуждает вести поиск антибиотиков с новыми сайтами связывания в пределах клетки и отсутствием перекрёстной устойчивости к уже известным антибиотическим соединениям. Однако, скрининг низкомолекулярных метаболитов, продуцируемых культивируемыми микроорганизмами, зачастую приводит к выявлению ранее известных соединений. В связи с этим возникает необходимость использования программ анализа генома, а также методов геномного редактирования, которые позволяют идентифицировать кластеры генов, ответственных за синтез потенциальных кандидатов в лекарственные препараты. Целью данной работы является введение мутаций в кластер генов биосинтеза Тетрациномицина Х (TcmX) и Ауропланина (Aur) с использованием методов случайного и направленного мутагенеза Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи: 1. Создать генетические конструкции на основе систем CRISPR/Cas9 и CRISPR/Cas12a для направленного мутагенеза генов биосинтеза Тетрациномицина Х (TcmX); 2. Оптимизировать методику подготовки компетентных клеток Amycolatopsis sp. А23 для трансформации плазмидными векторами на основе систем CRISPR/Cas9 и CRISPR/Cas12a 3. Получить клетки с делецией генов биосинтеза Тетрациномицина Х (TcmX) в геномном кластере tcmX; 4. Провести случайный мутагенез клеток Actinoplanes sp. 49252; 5. Получить мутированные штаммы Actinoplanes sp. 49252 и проверить их антибактериальную активность.