ИСТИНА

Синдром Коффина-Cириса является редким врождённым мультисистемным генетическим заболеванием, характеризующимся задержкой в развитии и умственной отсталостью. Причиной развития синдрома являются мутации в генах, кодирующих субъединицы хроматинремоделирующего комплекса BAF. В случае данной патологии прежде всего затрагиваются гены ARID1B и ARID1A. Для изучения роли ARID1 в нейрогенезе был использован модельный организм D. melanogaster. Специфические хроматинремоделирующие комплексы BAP и PBAP дрозофилы содержат перекрывающийся набор центральных субъединиц и AТФазы, но также несут специфические субъединицы osa и D4 (для BAP) или PB, Bap170 и SAYP (для PBAP). Osa является ортологом белка BAF250b/ ARID1 человека у D. melanogaster. Его нокдаун путем РНК-интерференции в постмитотических нейронах грибовидного тела мозга дрозофилы, являющегося критической структурой мозга для обучения и памяти, вызывает возрастную потерю аксонов в грибовидном теле и влияет на долговременную память. Для получения новой модели заболевания был использован метод геномного редактирования CRISPR/Cas9. С его помощью мы воспроизводим на молекулярном уровне те нарушения, которые происходят в случае синдрома Коффина-Cириса в мозге дрозофилы. В ходе работы модифицируется ген osa D. melanogaster. Для этого в линию мух, экспрессирующую Cas9, вносились две плазмиды: pHD и pU6. Первая плазмида несёт области, кодирующие эпитопы V5 и FLAG и ауксин- индуцибельный дегрон, а также репортёрный ген DsRed, loxP-сайты, сайты AttB и гомологичные плечи для рекомбинации. Вектор pU6 является матрицей для синтеза гидовой РНК. Наш подход, являющийся альтернативой методу РНК-интерференции, позволит создать линию мух, экспрессирующих меченый белок osa, который может быть селективно деградирован на определенной стадии развития.