ИСТИНА

Хроматин млекопитающих связан с ядерной оболочкой посредством сотен отдельных протяженных ламина-ассоциированных доменов, доля взаимодействующего с ламиной хроматина достигает 35-40% генома. Известно, что периферический хроматин прочно прикреплен к ламине. Поиск ответа на вопрос о том, каким образом решается пространственная проблема репликации прочно связанного с ламиной хроматина, представляется очень важным не только для понимания физиологии гетерохроматина, но и для выяснения пространственной организации репликации ДНК в клетке. Объектом исследования служили клетки культуры HeLa. Мечение реплицирующегося хроматина производили в течение 15 минут этинилдезоксиуридином, для визуализации метки методами флуоресцентной и электронной микроскопии использовали click-реакцию с азидопроизводными флуорохрома Alexa-488 и последующей иммуноцитологической детекцией Alexa-488 в качестве антигена в условиях стабилизации нативной структуры хроматина. Исследование особенностей структурной организации периферического хроматина в процессе репликации показало, что в реплицирующихся доменах метка распределяется неравномерно, преимущественно располагаясь на их поверхности. При этом наблюдается два типа реплицирующихся структур. В случае, когда репликация происходила со стороны ламины, хроматин локально откреплялся от ядерной оболочки. Если репликация протекала со стороны, обращенной к центру ядра, открепления от ядерной оболочки не наблюдалось. Следует отметить, что репликация гетерохроматина не сопровождалась глобальной деконденсацией хроматиновых фибрилл высшего порядка, наблюдается лишь частичное снижение плотности хроматина непосредственно в зоне расположения метки. Различие в поведении прикрепленного хроматина во время репликации может отражать как разные функциональные состояния хроматина, так и особенности организации подстилающей его ядерной оболочки. Кроме того, возможно существование различий в репликации конститутивного и факультативного гетерохроматина. Распределение метки по поверхности хроматиды позволяет предположить, что репликация происходит по поверхности компактизованной хроматиновой фибриллы, что объясняет необходимость ее локального открепления и отсутствие пространственных затруднений для доступа факторов репликации. Однако, нельзя исключить того, что распределение метки по поверхности вызвано низкой доступностью антигена внутри компактизованной хроматиды и не отражает полной картины репликации.