![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Вирус иммунодефицита человека остается крайне опасным неизлечимым заболеванием. Однако существующая высокоактивная антиретровирусная терапия, направленная на ингибирование вирусных белков, помогает поддерживать жизнь инфицированных на достойном уровне. Известно, что вирус активно использует клеточные белки для своей репликации. Новым и перспективным направлением создания ингибиторов является подавление взаимодействия вирусных белков с белками клетки хозяина. Поэтому изучение механизма участия клеточных белков-партнеров ВИЧ в репликации вируса является крайне актуальной задачей для последующего создания новых ингибиторов. Одним из таких белков-партнеров является SFPQ (Splicing factor, proline- and glutamine-rich). Он участвует в альтернативном сплайсинге, в транскрипции и транспорте мРНК. Известно, что SFPQ влияет на стадию обратной транскрипции. Также SFPQ обнаружен в прединтеграционном комплексе, включающем в себя обратную транскриптазу (ОТ) и интегразу (ИН). Известно, что рекомбинантные SFPQ и ИН ВИЧ-1 могут взаимодействовать друг с другом. Однако механизм влияния на интеграцию и обратную транскрипцию ВИЧ не изучен. в связи с этим целью данной работы было установление роли SFPQ в ранних стадиях репликации ВИЧ. Для определения стадии жизненного цикла ВИЧ, на которую влияет SFPQ, мы изучили влияние белка на репликацию с помощью VSV-G-псевдотипированного репликативно-некомпетентного вектора. Оказалось, что SFPQ является положительным фактором обратной транскрипции и интеграции. Следующим шагом было установление сайта связывания SFPQ с вирусными белками. Для этого было изучено взаимодействие рекомбинантных белков SFPQ и ИН или ОТ. Оказалось, что SFPQ способен взаимодействовать с ИН, но не с ОТ. Кроме того, с помощью пептидного фишинга был установлен участок взаимодействия ИН с SFPQ. Со стороны ИН – это участок 170-200 а.о., а со стороны SFPQ – 212-236 а.о. С помощью сайт-направленного мутагенеза и метода со-осаждения был установлен сайт связывания в ИН с SFPQ – R187. Однако вирус с мутацией R187A репликативно некомпетентен и его дальнейшее исследование невозможно. в процессе установления сайта взаимодействия со стороны SFPQ были валидированы данные пептидного фишинга – мутант Δ1-295 SFPQ не способен связывать ИН. Также мы суперэкспрессировали данный мутант SFPQ в HEK 293T и проверили активность псевдовируса. Оказалось, что Δ1-295 SFPQ не влияет на репликацию, что указывает на то, что влияние осуществляется за счет взаимодействия SFPQ с ИН. Таким образом, мы установили точный сайт связывания в ИН и регион в SFPQ, которые ответственны за взаимодействие друг с другом. Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ 20-04-00437.
№ | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
---|---|---|---|---|---|
1. | SBB_2022.pdf | SBB_2022.pdf | 28,1 МБ | 21 декабря 2022 [gottikh] |