ИСТИНА

Иммортализованные кератиноциты НаСаТ считаются условно нормальными и служат модельной системой для изучения дифференцировки и дисфункций кожи человека. При этом в популяции встречаются клетки разной плоидности и клетки с микроядрами (МЯ). МЯ являются причиной генетической нестабильности, однако НаСаТ сохраняют нетрансформированный статус с 1988 г. По-видимому, в культуре реализуются механизмы, позволяющие избегать трансформации. Цель работы: выяснение пути образования клеток с МЯ и их дальнейшей судьбы в культуре НаСаТ. МЯ окрашивали DAPI, для прижизненных исследований использовали ПО Vision Bio «West Medica». Оценку плоидности проводили в программе Fiji и с помощью проточной цитофлуориметрии. В популяции НаСаТ число клеток с МЯ на 1 сут после пересева составляет 4,5%, к 3 сут их число увеличивается до 12,1% и снижается к 6 сут до 10,1%. Было выделено 5 типов клеток с МЯ: клетки с мелкими (до 4 мкм2) одиночными и множественными МЯ, клетки с крупными одиночными и множественными МЯ и клетки с множественными МЯ, не содержащие основного ядра. Число клеток с мелкими одиночными МЯ в процессе культивирования не меняется. Увеличение числа клеток с МЯ на 3 сут происходит за счет остальных 4 типов. Уменьшение числа клеток с МЯ к 6 сут происходит за счет снижения числа клеток с мелкими множественными и одиночными крупными МЯ. Число клеток с множественными крупными МЯ и клеток без основного ядра продолжает увеличиваться. Клетки с множественными МЯ формируются в результате патологических митозов полиплоидных клеток. В культуре НаСаТ число клеток с повышенной плоидностью увеличивается с 3,9% (1 сут) до 16,5%(3 сут). Число патологических митозов при этом составляет около 0,7%. К 6 сут культивирования число полиплоидных клеток возвращается к исходному уровню; число патологических митозов так же снижается до 0,2%, при этом митотический индекс в популяции не меняется и составляет около 3,5%. Апоптотический индекс возрастает с 1,6% на 1 сут до 1,9% на 3 сут и 3,7% на 6 сут. Прижизненные наблюдения показали, что 60% клеток с множественными МЯ гибнут путем апоптоза. Клетки с крупными (предположительно полиплоидными) ядрами на 3-4 сутки культивирования вступают в патологический митоз (10 из 15), заканчивающийся образованием 2-5 клеток с МЯ; 60% дочерних клеток вступают в апоптоз. Возможно, в культуре НаСаТ спонтанно возникающие полиплоидные клетки вступают в патологический митоз, завершающийся образованием клеток с МЯ, которые элиминируются путем апоптотической гибели. НИР121032300098-5