ИСТИНА

Сибирская язва – тяжёлое инфекционное заболевание, вызываемое грамположительной спорообразующей бактерией Bacillus anthracis. Споры B. anthracis являются потенциальным биотеррористическим агентом. В связи с этим разработка эффективных вакцин против сибирской язвы с пролонгированным сроком хранения важная и актуальная задача. Основной антиген токсина сибирской язвы – протективный антиген (PA – protective antigen) представляет собой четырёхдоменный белок с молекулярной массой 83 кДа и является ключевым компонентом как существующих, так и разрабатываемых вакцин против сибирской язвы. Основная проблема, которую необходимо преодолеть при создании рекомбинантной вакцины – это крайне низкая стабильность рекомбинантного PA (rPA). К основным причинам нестабильности rPA относят наличие в составе белка сайтов протеолиза фурином и химотрипсином, а также остатков аспарагина, подверженных спонтанному дезаминированию. Известно, что отдельные домены РА также обладают протективной активностью. Ранее нами был получен короткий антиген сибирской язвы rPA3+4, представляющий собой третий и четвёртый домены PA c заменами аминокислотных остатков аспарагина (Asp713 и Asp719), которые в наибольшей степени подвержены спонтанному дезаминированию, на глутамины. В настоящей работе был получен рекомбинантный антиген сибирской язвы rPA1+2, представляющий собой первый и второй домены PA с модификациями аминокислотной последовательности, приводящими к инактивации сайтов протеолиза (замена 162NSRKKR167 на 162QSSNKE167 и делеция 313FF314). Продемонстрирована стабильность антигенов rPA3+4 и rPA1+2 в течение как минимум 19 дней при +37°С и как минимум 160 дней при +25°С. На основе экспрессионных конструкций для rPA1+2 и rPA3+4 впервые получен полноразмерный рекомбинантный PA, содержащий одновременно как замены аминокислотных остатков, подверженных спонтанному деаминированию, так и замены в сайтах протеолиза (rPA83m). Таким образом, показана возможность эффективной стабилизации rPA83m по сравнению с немодифицированным полноразмерным rPA. Полученные стабильные рекомбинантные антигены rPA1+2, rPA3+4 и rPA83m, а также комбинация rPA1+2 и rPA3+4 могут рассматриваться в качестве основы для создания вакцины против сибирской язвы. Работа поддержана грантом РНФ 18-14-00044.