ИСТИНА

Устойчивость бактерий к антибиотикам – серьёзная угроза общественному здоровью, признанная ВОЗ и Министерством здравоохранения России. Для её решения важную роль играет разработка методов идентификации веществ, обладающих ан-тибактериальной активностью. При поиске новых антибиотиков особенно важно рассматривать в качестве мишени грамотри-цательных бактерий, по своей природе устойчивых к действию большинства современных антимикробных средств. Ранее нами была разработана ультравысокопроизводительная платформа профилирования микробиомов, позволяющая идентифи-цировать биологическую активность отдельных компонентов микробных сообществ. В её основе лежит сочетание микрофлю-идной инкапсуляции единичных клеток в каплях двойной эмульсии и флуоресцентно-активируемой сортировки получаемых капель для отбора интересующего фенотипа. Для обнаружения антимикробной активности с помощью платформы важно наличие флуоресцентного штамма-сенсора. Требования к репортерному штамму включают высокий уровень флуоресцентного сигнала, его равномерное распределение в бактериальной популяции и отсутствие агрегации клеток при культивации в жидкой среде. В ходе данного исследования на основе E. coli был получен грамотрицательный биосенсор, удовлетворяющий вышепе-речисленным критериям. Панель штаммов E. coli была протестирована для оптимизации условий роста, морфологии клеток и однородности культуры. По данным уровня флуоресценции в культуре, проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии была выбрана оптимальная комбинация штамма BL21, гена зелёного флуоресцентного белка sfGFP и сильных промоторов T7 и pglpT при росте на средах BHI и TB, обеспечивающая оптимальные параметры биосенсора. Полученные штаммы могут быть использованы для ультравысокопроизводительного скрининга для поиска новых антибиотиков, активных в отношении грамотрицательных бактерий. Работа поддержана грантом РНФ 19-14-00331.