ИСТИНА

Насекомое-вредитель зерновых запасов Tenebrio molitor является важныммодельным объектом для биохимических исследований. Основную роль в пищеваренииу T. molitor играют сериновые и цистеиновые пептидазы, что дает возможность для ихподробного изучения.Биоинформатический анализ транскриптома кишечника T. molitor, проведенныйранее в нашей лаборатории, позволил выявить высокоэкспрессируемую пептидазуSerP38 (GenBankNCBIID: QRE01764), которая характеризуется неканоническимсоставом субсайта S1 связывания субстрата Gly-Gly-Asp. Ранее ферменты с такимсоставом субсайта S1 были выявлены только у беспозвоночных животных. Такой составсубсайта S1 является редким для пептидаз данного семейства и представляет интересдля дальнейшего изучения.Помимо пептидаз с классической триадой аминокислотных остатков в активномцентре у насекомых широко распространены гомологи сериновых пептидаз, которыемогут иметь одну или несколько замен в составе активного центра. Они плохо изучены иданных об их функциях и физико-химических свойствах крайне мало, поэтомудальнейшее их изучение заслуживает особого внимания.Целью работы являлась характеристика свойств рекомбинантной пептидазы rSerP38T. molitor. Для сравнения были выбраны пептидаза SerP69, выделенная ранее иохарактеризованная в литературе как главный пищеварительный химотрипсин, ирекомбинантный гомолог сериновых пептидаз семейства S1 rSerPH122.Была проведена сравнительная характеристика: (1) активности и стабильностипептидаз в широком диапазоне рН (3.0–11.0); (2) действия на них низкомолекулярных ибелковых ингибиторов; (3) субстратной специфичности с использованием набора п-нитроанилидных пептидных субстратов. Для rSerP38 определены кинетическиепараметры гидролиза наиболее эффективных субстратов Suc-AAPF-pNA и Glp-AAFpNA.Протестировано действие пептидазы на коллаген, что позволит оценитьвозможные перспективы ее применения.Анализ совокупности полученных биоинформатических и биохимических данных оSerP38, SerP69 и SerPH122 T. molitor свидетельствует о том, что рассматриваемыепептидазы имеют высокий уровень экспрессии мРНК в траскриптоме кишечника,обладают химотрипсин-подобной специфичностью и входят в состав пищеварительногокомплекса T. molitor, играя важную роль на разных этапах его функционирования.Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-24-00553, https://rscf.ru/project/22-24-00553/