ИСТИНА

Пенициллинацилаза (ПА) успешно применяется для стереоселективного синтеза N- ацилированных производных цистеина – хиральных дериватизирующих агентов (ХДА) для ВЭЖХ. С помощью ПА был получен ряд новых хиральных тиолов и показана возможность их применения для анализа широкого круга энантиомеров аминосоединений – аминокислот, первичных аминов и аминоспиртов. Шесть SH-соединений оказались более эффективными ХДА, чем традиционный N-ацетил цистеин (NAC). Однако не для всех энантиомеров удается добиться хорошего хроматографического разрешения, которое зависит от внутримолекулярных взаимодействий между структурой хирального тиола и анализируемого аминосоединения. Потенциал ПА для получения ранее неизвестных ХДА может быть увеличен за счет использования новых ацильных доноров, например, хлорацетамида с последующим химическим замещением галогена на тиольную группу. Полученные таким образом ХДА показали высокую эффективность на некоторых «трудных» энантиомерах. Наряду с созданием новых ХДА перспективным подходом для улучшения эффективности хирального ВЭЖХ анализа аминосоединений представляется физико- химическая инженерия аналитической системы. Так, например, повышение температуры приводит к более эффективному разделению диастереомеров. Дополнительные возможности представляет также использование ион-парных реагентов, применяемых в обращенно- фазовой ВЭЖХ для более эффективного разделения структурных аналогов. Использование солей четвертичного аммония (положительный заряд) с различными алифатическими радикалами приводит к существенному улучшению разделения аминокислот (отрицательный заряд) после предколоночной модификации не только различными ХДА, но и традиционным NAC. При добавлении тетрабутиламмония (ТБА) в подвижную фазу ВЭЖХ наблюдается улучшение хроматографического разделения диастереомеров фенилаланина и хорошее разделение (Rs > 1.5) неразделяемого при использовании NAC лейцина, глутамата. С помощью триметилоктиламмония можно улучшить разрешение аспартата не разделяемого с NAC даже в присутствии ТБА. Таким образом обнаружено, что применение ион-парных реагентов существенно расширяет возможности хирального анализа аминокислот. Эта дополнительная степень свободы, в сочетании с высоким биокаталитическим потенциалом ПА для синтеза новых хиральных тиолов, может быть использована при решении наиболее трудных аналитических задач по определению отдельных энантиомеров аминосоединений.