ИСТИНА

Флуоресцентная микроскопия, в том числе – конфокальная сканирующая лазерная микроскопия (КЛСМ) – широко применяется для определения локализации тех или иных веществ, либо меченых флюорофорами, либо обладающих собственной флуоресценцией. Наиболее информативным является применение «многоцветной» флуоресценции, позволяющей оценивать компартментализацию и колокализацию целевых веществ. Часто при этом необходимы предварительные исследования спектров возбуждения и эмиссии, позволяющие подобрать оптимальные условия наблюдения. Особенно полезным при таких измерениях является применение микроспектроскопии, позволяющей наблюдать спектры эмиссии непосредственно в клетках, т.е. в условиях, идентичных условиям целевых изменений. На примере сочетаний таких распространенных в лабораторной практике флуоресцирующих веществ, как 4’,6-диамидино-2-фенилиндол, изотиоцианат флуоресцеина, эозин и родамин [1-4], использовавшихся при исследованиях, направленных на создание комбинированных селективных мицеллярных цитостатиков, показано, что микроспектроскопия с использованием КЛСМ позволяет наблюдать влияние на одновременное наблюдение нескольких флюорофоров таких характеристик, как конечная ширина и форма спектров возбуждения и эмиссии, а также диапазон концентраций флюорофоров. Наличие экспериментально определенных спектров эмиссии флюорофоров, находящихся в макрофагах, бактериях, нормальных и опухолевых клетках, позволяет оптимизировать как спектральные, так и концентрационные параметры, необходимые для одновременного наблюдения локализации нескольких флюорофоров.