ИСТИНА

Обратная транскриптаза человека (hTERT) – фермент, активный в стволовых, половых и раковых клетках, поддерживающий длину теломерных повторов. Мутации в промоторе гена hTERT встречаются при множественных видах рака и часто представлены заменами G>A матричной цепи в позициях 124, 146 и двойной заменой 138/139 относительно стартового кодона. Полагают, что данные мутации образуют сайт связывания факторов семейства ETS, действие которых повышает экспрессию гена hTERT. Рассматриваемый участок некодирующей цепи промотора hTERT имеет G-богатую последовательность, которая в определенных условиях может формировать три последовательно расположенных параллельных G-квадруплекса (G4) [1]. Наиболее распространенное повреждение dG - 8-оксо-2'-дезоксигуанозин (8-oxoG) репарируется с помощью ферментов эксцизионной репарации оснований (BER). 8-Оксо- ДНК-гликозилаза (OGG1) узнает и удаляет 8-oxoG с образованием апурин- апиримидинового (AP) сайта, который подвергается действию AP-эндонуклеазы (APE1). Мы предположили, что закрепление описанных неудаляемых тканеспецифичных мутаций может быть результатом снижения эффективности работы ферментов BER в области G4. Для проверки этой гипотезы было изучено взаимодействие ферментов APE1 и OGG1 человека с модельными фрагментами промотора hTERT, содержащими замены G>X (где X – 1,2-дидезоксирибоза (THF), устойчивый к спонтанному β-элиминированию аналог AP-сайта или 8-oxoG) в различных положениях, соответствующих “драйверным” мутациям. В первую очередь мы определили влияние положения замен G>Х в матричной цепи промотора hTERT на гидролитическую активность APE1 и OGG1 в условиях формирования G4. Эффективность удаления модификации зависела от ее положения в G- трактах: хуже всего расщеплялись модификации в позициях 124 и 146, в которых наиболее часто встречаются мутации при онкологических заболеваниях. Присутствие C- богатой цепи, комплементарной к матричной цепи промотора hTERT, увеличивало гидролитическую активность APE1: независимо от ионной силы, наличия и положения модификации репарация THF происходила эффективно. С другой стороны, эффективность удаления 8-oxoгуанина в присутствии комплементарной цепи белком OGG1 по-прежнему была понижена в положениях 124 и 146. Таким образом, на репарацию повреждений в матричной цепи промотора гена hTERT белком APE1 значительным образом влияет наличие G4, тогда как эффективность удаления повреждений белком OGG1, по всей видимости, зависит от нуклеотидного окружения 8-oxoG. Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что закрепление мутаций в позициях 124 и 146 относительно стартового кодона, может быть результатом сниженной эффективности работы системы BER.