ИСТИНА

Нейрональные Cа2+-сенсоры (НКС) – семейство EF-hand содержащих Са2+-связывающих белков, способных в ответ на изменения концентрации внутриклеточного Cа2+ с высокой специфичностью регулировать белки мишени, принимая участие в передаче различных сигналов. В пределах семейства НКС обладают высокой степенью структурного сходства, однако при этом проявляют различные чувствительности к Cа2+, а диапазон мишеней, индивидуальных для каждого НКС, достаточно широк. Ранее нами было показано, что С-концевой сегмент, вариабельная в пределах семейства С-концевая последовательность, в случае фоторецепторного НКС рековерина отвечает за регуляцию функциональных свойств этого белка, таких как сродство к Са2+, способность связываться с мембранами, а также способность модулировать активность мишени – родопсинкиназы. В настоящей работе высказано предположение о том, что такая регуляторная функция С-концевого сегмента является универсальным свойством белков НКС. Для проверки этого предположения сконструированы два химерных белка на основе НКС рековерина и GCAP2: в каждом таком белке С-концевой сегмент заменен на аналогичную последовательность из другого НКС. Показано, что обмен последовательностями С-концевых сегментов не оказывает существенного влияния на структурные особенности и термостабильность исходных белков. Однако замена С-концевого сегмента сказывается на функциональных свойствах каждого НКС. Так, в случае рековерина замена вызывает снижение афинности белка к Са2+ с одновременным повышением его сродства к мембранам при низких концентрациях катиона, а также нарушение его способности взаимодействовать с родопсинкиназой. Однако такая замена не придает рековерину способность активировать мишень GCAP2 – гуанилатциклазу. При этом в случае GCAP2 замена С-концевого сегмента ухудшает способность белка активировать гуанилатциклазу. Таким образом, наличие в структуре НКС определенного С-концевого сегмента является необходимым, но недостаточным условием для выполнения им соответствующих функциональных свойств.