ИСТИНА

Когезин считается ключевым белком, обеспечивающим компактизацию хроматина и сегрегацию генома на пространственно обособленные топологически ассоциированные домены, образуя контакты между удаленными друг от друга геномными локусами. Такая модель предполагает, что когезин должен ограничивать пространственную динамику локусов хроматина, что может быть особенно важно при возникновении двунитевых разрывов ДНК. В этом случае компактизация хроматина должна уменьшать вероятность образования хромосомных перестроек между разными локусами. Чтобы изучить роль когезина в ограничении пространственной динамики хроматина в нормальном и поврежденном состоянии, мы создали на базе клеточной линии HCT116 культуру, в которой с помощью технологии CRISPR-Sirius визуализировали в живых клетках геномный локус, содержащий сайт связывания когезина. Для деплеции когезина (субъединицы RAD21) в этих клетках мы использовали систему ауксин-индуцируемого дегрона. Для этого к кодирующей последовательности гена RAD21 в геноме была добавлена аминокислотная последовательность — дегрон, и в клетках экспрессировалась убиквитинлигаза OsTIR1, которая при добавлении ауксина направляла RAD21 на деградацию, приводя к более чем 90% деплеции этого белка в течение четырех часов. Для индукции двунитевых разрывов ДНК мы использовали этопозид, являющийся ингибитором ДНК-топоизомераз типа II. В качестве меры подвижности визуализированного локуса в модели аномальной диффузии мы использовали коэффициент диффузии и показатель аномальной экспоненты (α), вычисленные путем MSD-анализа треков индивидуальных сигналов, полученных путем таймлапс конфокальной микроскопии. При деплеции RAD21 наблюдалось увеличение подвижности визуализированного геномного локуса. Это согласуется с предположением, что когезин выступает в качестве фактора, ограничивающего подвижность хроматина. При глобальной индукции двунитевых разрывов этопозидом не наблюдалось значительного увеличения подвижности визуализированного локуса. Однако если двунитевые разрывы индуцировать на фоне деплеции RAD21, то подвижность визуализированного локуса возрастала. Полученные данные свидетельствуют о том, что когезин является фактором, ограничивающим подвижность хроматина как в норме, так и в условиях индукции двунитевых разрывов. Такие данные позволяют предположить, что выявленная ограничивающая роль когезина может уменьшать вероятность образования хромосомных транслокаций.