ИСТИНА

Сплайсинг – процесс удаления интронов из первичных транскриптов эукариот, осуществляемый сплайсосомным комплексом из пяти малых ядерных РНК (мяРНК) и разнообразных белков. Множество сайтов внутри мяРНК модифицируются посттранскрипционно, однако роль данных модификаций часто малоизучена. В данной работе мы стремились понять роль модифицированных нуклеотидов m6Am30 в мяРНК U2 и m2G72 в мяРНК U6.Для проведения анализа на основании клеток HeLa S3 получили две клеточных линии с нокаутом генов, кодирующих метилтрансферазы METTL4 и THUMPD2. Показано, что первый белок метилирует Am30 в мяРНК U2, а второй G72 в мяРНК U6. Чтобы оценить всевозможные изменения сплайсинга при исчезновении каждой из модификаций провели мечение 5-этинилуридином новосинтезированной РНК в трех линях клеток (диком типе и двух линиях с нокаутом). При сравнении количества несплайсированной и сплайсированной формы каждого интрона через 20 минут и 24 часа после добавления 5-этинилуридина была получена скорость преобразования каждого сайта сплайсинга в клетке. Полученные данные позволили оценить изменения сплайсинга, произошедшие после исчезновения каждой из модификаций. Для обеих нокаутных клеточных линий было замечено малое по амплитуде, общее замедление сплайсинга, а также снижение аккуратности работы сплайсосомы, однако без значительной зависимости от конкретных характеристик сайтов сплайсинга, таких как длина интрона, или его положение на транскрипте. Как следствие более медленного сплайсинга в обеих клеточных линиях наблюдали накопление интронов по сравнению с диким типом. Обобщая, метилирование оснований Am30 в мяРНК U2 и G72 в мяРНК U6 имеет общий характер и важно для обеспечения оптимальной скорости и точности сплайсинга.