ИСТИНА

Послеродовые эндометриты и маститы, ведущие к длительному бесплодию и развитию воспалительно-дистрофических процессов в репродуктивных органах и молочной железе, напрямую влияют на рентабельность молочного скотоводства. К настоящему времени разработано большое количество методов высокоэффективной терапии эндометритов и маститов у коров. Однако в состав подавляющего большинства лекарственных средств входят различные химиотерапевтические активные компоненты, гормоны и др., обладающие высокой биодоступностью, накапливающиеся в мышечной ткани и внутренних органах коров, выделяющиеся с моло¬ком и способствующие появлению микрофлоры с множественной лекарственной устойчивостью [1]. Ветеринарный препарат Аргумистин® лишен этих недостатков. Активным компонентом Аргумистина® являются наночастицы серебра, стабилизированные хлоридом бензилдиметил[3-(миристоиламино)-пропил]аммония (мирамистином) [2]. Из практики медицинского применения мирамистина и коллоидного (наноразмерного) серебра известно, что они обладают низкой биодоступностью при местном применении. Однако на сегодняшний день актуальной остается необходимость изучения остаточных количеств мирамистина и серебра в молоке и в организме животных, поскольку практики их широкого использования (как вместе, так и по отдельности) в терапии маститов и эндометритов КРС до сегодняшнего дня не было. Понимание биодоступности мирамистина и серебра при интрацистернальном и внутриматочном введении Аргумистина® связано с определением периода выведения мирамистина и серебра из организма, а также с последующим установлением допустимого срока убоя коров на мясо и сроков браковки молока после применения мирамистин– и серебросодержащих препаратов – в целях контроля пищевой безопасности продуктов животноводства. Поэтому целью исследования являлась разработка и валидация методики определения активных компонентов препарата Аргумистин® в плазме крови и молоке коров методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием и методом атомно-эмиссионной спектроскопии с индуктивно связанной плазмой для проведения различных фармакокинетических исследований по выведению активных компонентов препарата Аргумистин® из организма млекопитающих. Разработка и валидация метода определения мирамистина в плазме крови и молоке коров проводились при помощи жидкостного хроматографа Agilent 1290 (AgilentTechnologies, США) с автоматическим инжектором, диодно-матричным детектором и тандемным трехквадрупольным масс-спектрометром Agilent 6460 (AgilentTechnologies, США), оснащенным источником ионизации электрораспылением Agilent Jet Stream Electrospray Ionization. Для определения серебра был выбран метод атомно-эмиссионной спектроскопии с индуктивно связанной плазмой. Определение серебра в молоке и крови коров проводили при помощи ИСП-АЭС Agilent 5100. Предел количественного определения (ПКО) мирамистина определяли как концентрацию препарата, для которой соотношение сигнал-шум (или сигнал холостой пробы) составляло не менее 10:1. ПКО в молоке и плазме составил 1,5 мкг/л. Предел обнаружения мирамистина определяли как концентрацию препарата, для которой соотношение сигнал-шум (или сигнал холостой пробы) составляло не менее 3:1. ПО в молоке и плазме составил 0,5 мкг/л. ПКО серебра определяли как концентрацию препарата, для которой соотношение сигнал-шум (или сигнал холостой пробы) составляло не менее 10:1. ПКО в молоке и плазме составил 2,4 и 1,6 нг/мл соответственно. ПО серебра определяли как концентрацию препарата, для которой соотношение сигнал - шум (или сигнал холостой пробы) составляло не менее 3:1. ПО в молоке и плазме составил 0,7 и 0,5 нг/мл соответственно. В рамках апробации методики определения мирамистина и серебра методом ВЭЖХ-МС/МС и ИСП-АЭС формировались две опытные группы, каждая из которых состояла из 3 коров. Во всех экспериментах использовали препарат Аргумистин®, содержащий в качестве активных компонентов 100 мкг/мл мирамистина и 50 мкг/мл коллоидного серебра. Животные первой группы получали Аргумистин® интрацистернально. Животные второй группы получали Аргумистин® внутриматочно. Продолжительность курса введения определялась на основании результатов клинических исследований и проекта инструкции по применению препарата: для интрацистернального введения 3 дня, по одному введению в одну долю вымени после утренней дойки один раз в сутки; продолжительность курса внутриматочного введения составляла 3 дня, по одному введению один раз в сутки. При интрацистернальном введении однократная доза препарата составляла 10 мл, при внутриматочном введении препарата однократная доза составляла 100 мл. Схема отбора образцов крови у животных, получающих Аргумистин® интрацистернально и внутриматочно: непосредственно перед первым введением препарата; через 6 часов после первого ввода препарата; через 12 часов после первого ввода препарата; через 24 часа после первого ввода препарата; через 6 часов после второго ввода препарата; через 12 часов после второго ввода препарата; через 24 часа после второго ввода препарата; через 12 часов после третьего ввода препарата; через 48 часов после третьего ввода препарата; через 72 часа после третьего ввода препарата. При апробации разработанной методики было установлено, что содержание мирамистина и серебра во всех образцах плазмы крови и молока коров после интрацистернального и внутриматочного применения препарата Аргумистин® не превышало пределов количественного обнаружения активных компонентов (менее 1,5 нг/мл для мирамистина и менее 1 и 5 нг/мл для серебра в молоке и плазме крови соответственно). Таким образом, коллоидное серебро и мирамистин, входящие в состав испытуемого препарата при интерцистернальном и внутриматочном введении обладают низкой биодоступностью. При интрацистернальном и внутриматочном введении препарата Аргумистин® молекулы мирамистина, находящиеся в частично связанном с поверхностью частиц коллоидного серебра состоянии за счет электростатических и координационных взаимодействий, в используемых дозировках и концентрациях не всасываются из молочной железы и матки в системный кровоток и элиминируются из организма коров, в основном, с молоком и выделениями. Низкая биодоступность активных компонентов препарата, наряду с его высокой терапевтической эффективностью в лечении коров, больных маститами и эндометритами, кардинально отличает Аргумистин® от широко распространенных антибактериальных препаратов [3], бракующих молоко и мясо на длительный (5-10 дней) срок после последнего введения. Использование Аргумистина® не влечет за собой периода ожидания, и после внутриматочного и интрацистернального введения препарата Аргумистин® мясную и молочную продукцию (из здоровых долей вымени) животноводства можно использовать в пищевых целях без ограничений.