|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Функциональный анализ мутантных форм ДНК-метилтрансферазы Dnmt3а, обнаруженных при раковых заболеванияхдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Кирсанова О.В., Громова Е.С.
- Автор: Храброва Д.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2018
- Аннотация: Метилирование ДНК – важная эпигенетическая модификация, необходимая для регуляции многих клеточных процессов, как в прокариотах, так и в эукариотах. В эукаротах ДНК-метилтрансфераза (МТаза) Dnmt3a осуществляет de novo метелирование ДНК. Она переносит метильную группу с кофактора S-аденозил-L-метионина на атом углерода С5 в остатке цитозина в CpG-последовательности ДНК, создавая тем самым профиль метилирования ДНК. При развитии онкологических заболеваний у людей происходят множественные нарушения, в том числе изменение рисунка метилирования, и точечные мутации в МТазе DNMT3A. В частности, при развитии острой миелоидной лейкемии (ОМЛ) наблюдается максимальное производство мутированных форм DNMT3A, роль которых в функционировании неизвестна. Целью данной работы стало исследование влияния наиболее распространенных мутаций, обнаруженных в каталитическом домене МТазы человека DNMT3A при острой миелоидной лейкемии, на функционирование каталитического домена МТазы мыши Dnmt3a. В работе выбраны шесть мутаций, присутствующих в каталитическом домене ДНК-метилтрансферазы человека DNMT3A при развитии лейкемии (S714C, P777R, R736H, R771L, R635W, F752V). В каталитическом домене МТазы человека DNMT3A-CD и мыши Dnmt3a-CD практически нет различий в аминокислотной последовательности и структуре, поэтому Dnmt3a-CD мыши может выступать в роли модельной системы при изучении эукариотической DNMT3A. Впервые показано, что мутации в участках каталитического домена МТазы мыши, не расположенные близко к узнающей и каталитической петлям фермента (P187R, R146H, R181L, R45W и F162V), приводят к снижению метилирующей активности, при этом мутации R146H и R45W также сказываются и на способности фермента связываться с ДНК. В то же время показано, что мутация, попадающая в каталитическую петлю фермента (S124C), приводит к снижению метилирующей активности Dnmt3a-CD без нарушения способности связываться с ДНК. Высказаны предположения о возможном влиянии этих мутаций на функционирование фермента: вероятно, некоторые мутации (R181L, F162V, R45W) локально нарушают третичную структуру Dnmt3a-CD, а другие (S124C, R146H, P187R) – влияют на стабильность и положение каталитической петли. Полученные in vitro результаты могут стать основой для проведения дальнейших анализов in vivo, так как они полезны для понимания связи между сбоями в функционировании DNMT3A в клетках и установлением нового рисунка метилирования, характерного для ОМЛ.
- Добавил в систему: Кирсанова Ольга Вячеславовна