|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Формирование постожогового рубца: иммуногистохимическое исследование рубцовой ткани и биохимические характеристики кровидипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Рубина К.А., Сысоева В.Ю.
- Автор: Григорьева О.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2008
- Аннотация: . Введение Формирование постожогового рубца часто сопровождается различного рода осложнениями: гипертрофия или атрофия тканей, формирование келоидных рубцов. По данным литературы, фибробласты дермы являются основными участниками процесса заживления раны (Monaco and Lawrence, 2003). В настоящее время при поражениях кожи используется метод закрытия постожоговых поверхностей синтетическими носителями, покрытыми монослоем фибробластов. Для этих целей используются клетки сертифицированных линий аллогенных фибробластов человека или так называемые эмбриональные фибробласты. Однако такой подход в ряде случаев приводит к развитию нежелательных процессов – отторжению и аллергической реакции из-за использования генетически несовместимого клеточного материала. Поэтому, перспективным направлением представляется разработка методов выделения, культивирования и применения аутологичных фибробластов для использования при лечении последствий ожогов большой площади. Кроме того, выделенные фибробласты могут явиться удобной моделью для тестирования и сертификации лекарственных препаратов, разрабатываемых для лечения постожоговых поверхностей. Так, уже в настоящее время ведутся работы по исследованию действия витаминов группы В и антиоксидантов, способствующих заживлению ран. Для тестирования таких препаратов, как правило, используются линейные фибробласты, которые отличаются от клеток первичной культуры по ряду ключевых характеристик – митотическому индексу, потребностью в факторах роста, разной степенью трансформации и, наконец, функциональными характеристиками. Известно, что при ожогах срок заживления может значительно увеличиваться, а ожоги второй и третьей степени часто сопровождаются образованием гипертрофированного шрама (Monte Alto Costa, 1999). Это говорит об отличном от других ран течении заживления, и, соответственно, об изменении характеристик фибробластов, участвующих в формировании рубца. Анализ биоптатов ожоговых ран и рубцов на разные сроки заживления позволит выявить морфологические и функциональные особенности фибробластов, участвующих в заживлении раны и формировании рубца, а также охарактеризовать особенности течения заживления ожога. По данным литературы, заживление регулируется большим количеством цитокинов и факторов роста. Однако эти процессы изучены не полностью. Особенно мало данных известно о контролируемом завершении выполнения клетками своих функций в ходе заживления, что вероятно также регулируется факторами роста (Werner and Grose, 2003). Поэтому анализ их содержания в крови ожоговых больных и сравнение с сывороткой здоровых доноров, а также сопоставление этих данных с результатами цитологических и гистологических исследований позволит в дальнейшем исследовать молекулярные механизмы заживления постожоговых ран и разработать способы выделения и наращивания фибробластов для закрытия ожоговых поверхностей. 1.1 Цели и задачи: 1. На криосрезах постожоговой рубцовой ткани иммуногистохимическими методами оценить число сосудов на разные сроки в нормальной и постожоговой ткани на разные сроки в период заживления. Проследить изменение пролиферативной и апоптотической активности клеток в процессе заживления раны и формировании рубца. 2. Оценить уровень факторов роста VEGF, HGF, bFGF, ангиопоэтина-1 в образцах сыворотки крови ожоговых больных по сравнению с сывороткой здоровых доноров и сопоставить данные с результатами цитологических и гистологических исследований. 3. Сравнить пролиферативные способности нормальных фибробластов кожи и фибробластов, выделенных из постожогового рубца, сопоставить апоптотический индекс. Оценить функциональную активность и морфологические характеристики фибробластов, участвующих в заживлении раны и формировании рубца. Выводы 1. На ранних и средних сроках формирования постоожогового рубца отсутствует пролиферативная и апоптотическая активность в ткани. 2. На поздних сроках формирования рубца (несколько месяцев после повреждения) в ткани обнаруживается пролиферативная и апоптотическая активность. С увеличением срока заживления число пролиферирующих клеток падает, а число апоптотических клеток возрастает. 3. Пролиферирующие структуры, обнаруживаемые в рубцовой ткани, являются сосудами. 4. В сыворотках крови пациентов с ожогами по сравнению со здоровыми людьми обнаруживается значительное повышение содержания VEGF, bFGF, HGF и ангиопоэтина-1. 5. Фибробласты выделяются из ожоговой ткани по стандартной методике. При стандартных условиях ведения культуры клетки не проявляют пролиферативной активности и погибают.
- Добавил в систему: Сысоева Вероника Юрьевна