Определение комплексных кинетических параметров реакции синтеза ампициллина, катализируемой пенициллинацилазой из Escherichia coli и ее мутантными формамидипломная работа (Бакалавр)
Аннотация:Курсовая работа по физической химии (IV курс химического факультета МГУ)
Целью данной работы стало получение 2-х мутантных форм пенициллинацилазы с мутациями близ активного центра, определение комплексных кинетических констант для реакции синтеза ампициллина из амида D-фенилглицина и 6-АПК при катализе полученными мутантами, а также объяснение полученных каталитических характеристик мутантных форм в зависимости от проведенных мутаций.
Методами генной инженерии получены две мутантные формы пенициллинацилазы αArg145Gly и βPhe256Arg+αArg145Gly.
Определены кинетические параметры реакции гидролиза модельного субстрата NIPAB для пенициллинацилазы дикого типа, мутантов βPhe256Arg, αArg145Gly и впервые для βPhe256Arg+αArg145Gly.
Определены комплексные кинетические параметры β и γ реакции синтеза ампициллина для пенициллинацилазы дикого типа, мутантов βPhe256Arg, αArg145Gly и впервые для βPhe256Arg+αArg145Gly. Экспериментально показана аддитивность эффектов, к которым приводит введение одиночных мутаций (βPhe256Arg и αArg145Gly), в двойном мутанте βPhe256Arg+αArg145Gly.