|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Кинетические свойства и термостабильность рекомбинантной формиатдегидрогеназы из дрожжей Candida boidiniiдипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Тишков В.И.
- Автор: Угланова Светлана Владимировна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2006
- Аннотация: На первом этапе работы было проведено культивирование штамма-продуцента ФДГ из C.boidinii, получена биомасса с содержанием фермента до 40% от общего белка клетки и с помощью вновь разработанной методики были получены гомогенные препараты ферменты, которые в дальнейшем использовали для изучения кинетических свойств и термостабильности (данная работа) и в экспериментах по дифференциальной сканирующей калориметрии. Анализ кинетических свойств CboФДГ свидетельствует, что этот фермент имеет близкие параметры с ФДГ из Pseudomonas sp.101. Величина Км фермента по NAD+ была постоянной при концентрациях формиата выше 0,5М. Проведено систематическое исследование термостабильности CboФДГ. Показано, что механизм термоинактивации в диапазоне рН 6-8 является мономолекулярным, а зависимость константы скорости инактивации от температуры описываются уравнением теории активированного комплекса. Оказалось, что наиболее высокая стабильность и наиболее сильное изменение константы скорости инактивации от температуры наблюдается при рН 7,0. Высокие концентрации фосфат-иона и формиат-иона оказывали сильный стабилизирующий эффект (до 100 раз) как при рН 7,0, так и при рН 8,0. Аналогичный эффект для ФДГ из Pseudomonas sp.101 в случае формиата не наблюдается. Сравнение констант скоростей инактивации дрожжевой и бактериальной формиатдегидрогеназ показало, что даже в условиях наиболее оптимальных для CboФДГ (концентрации формиата натрия более 1,5М) он все равно как минимум в 10 раз менее стабилен, чем ФДГ из Pseudomonas sp.101. Результаты кинетических экспериментов, свидетельствующие о более высокой стабильности бактериальной формиатдегидрогеназы по сравнению с дрожжевой подтверждаются данными по дифференциальной сканирующей калориметрии.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович