|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Оксидаза D-аминокислот из дрожжей Trigonopsis variabilis: экспрессия в клетках E.coli и свойства рекомбинантного ферментадипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Тишков В.И.
- Автор: Хороненкова С.В.,
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2005
- Аннотация: 1. Проведена оптимизация экспрессии оксидазы D аминокислот из дрожжей Trigonopsis variabilis в клетках E.coli. Выход активного фермента составил 13000 Ед с литра среды или 7% от общего растворимого белка E.coli. 2. Разработаны методы очистки рекомбинантного фермента, получены препараты TvDAAO с чистотой не менее 90-95%. 3. Изучены кинетические свойства рекомбинантного фермента. Показано, что при концентрациях выше 20 мкг/мл зависимость активности TvDAAO от её концентрации не является линейной. Показано, что TvDAAO стабильна в диапазоне рН 6,0– 9,0. 4. Исследована термостабильность рекомбинантного фермента в диапазоне 50-60 оС. Показано, что кинетика инактивации сильно зависит от концентрации фермента. При концентрациях ниже 20 мкг/мл инактивация протекает, по крайней мере, в две стадии. Константа скорости второй стадии процесса не зависит от концентрации белка. Анализ температурной зависимости в соответствии с теорией активированного комплекса позволил определить активационные параметры DH# = (330 ± 10) кДж/моль, DS# = (410 ± 40) Дж/(моль*К). Предложена общая схема инактивации фермента при различных концентрациях. 5. На основе компьютерного расчета получены модельные структуры мономера и димера DAAO из дрожжей T. variabilis.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович