|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Использование ДНК, содержащих 2-пиримидинон для изучения каталитического механизма CpG-узнающих ДНК-метилтрансфераз SssI и Dnmt3a-CDдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Кирсанова О.В., Субач О.М., Громова Е.С.
- Автор: Черепанова Наталья Александровна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2007
- Аннотация: Сконструированы и охарактеризованы 18-звенные ДНК-дуплексы, аналоги субстрата CpG–узнающих ДНК-метилтрансфераз (МТаз) SssI и Dnmt3a-CD, содержащие остаток 2-пиримидинона в участке узнавания CpG или рядом с ним. Показано, что данная модификация ДНК не влияет на узнавание ДНК этими ферментами. M.SssI и Dnmt3a-CD образуют ковалентные интермедиаты с ДНК-дуплексами, содержащими 2-пиримидинон в позиции цитозина-мишени. Обнаружено, что ключевую роль в образовании ковалентных интермедиатов играет остаток цистеина. В случае M.SssI этим остатком является Сys141. Показано, что конъюгаты МТаз SssI и Dnmt3a-CD с 2-пиримидинонсодержащей ДНК менее стабильны и выход их меньше, чем в случае аналогичных конъюгатов прокариотической МТазы М.HhaI (участок узнавания GCGC) с ДНК. Проанализирована возможность образования конъюгатов мутантных форм M.SssI: C141S и Q147L (из мотива IV), V188A (из мотива VI), S317A и T313D (из вариабельной области фермента) с ДНК-дуплексами, содержащими 2-пиримидинон в позиции цитозина-мишени. Замены S317A и V188A не влияли на этот процесс, тогда как в случае T313D и Q147L образования конъюгата МТаза-ДНК не наблюдалось. Сделано предположение о роли этих аминокислотных остатков в метилировании ДНК. Выявлены различия в механизме образования ковалентных интермедиатов в случае CpG-узнающих МТаз и МТаз, узнающих 4-8 звенные нуклеотидные последовательности в ДНК.
- Добавил в систему: Кирсанова Ольга Вячеславовна