|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Создание системы для контролируемой деградации белка Ku70дипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Мазуров Д.В., Готтих М.Б.
- Автор: Капитонова М.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2020
- Аннотация: Белок Ku70 вместе с белком Ku80 образует гетеродимер Ku, играющий важную роль в метаболических путях клетки. Есть достаточно многочисленные и часто противоречивые данные, показывающие, что белок Кu участвует также и в репликации ВИЧ-1, влияя на стадии интеграции и/или репарации и транскрипции с интегрированной вирусной ДНК. Однако достоверно показать влияние Кu именно на транскрипцию до сих пор не удавалось, поскольку не было системы, позволяющей снижать концентрацию белка Ku70 в определённый момент времени. Целью данной работы являлась разработка системы индуцибельной деградации белка Кu70 для более точного понимания его роли в репликации ВИЧ-1. С использованием линии клеток HEK 293Т_Ku70-AID, в которых эндогенный белок Ku70 слит с укороченным вариантом ауксин-индуцибельного дегрона (AID), исследована возможность контролируемой деградации Ku70-AID в присутствии белка растений osTIR-1 и ауксина. Показано, что при экспрессии osTIR-1 с плазмидного вектора происходит эффективная деградация Ku70-AID при добавлении ауксина, однако при стабильной экспрессии osTIR-1 под конститутивным промотором в этих клетках деградация Ku70-AID отсутствует. Получен вектор эукариотической экспрессии pSBtet-osTIR-HA-puro, в котором экспрессия osTIR-1 находится под контролем индуцибельного промотора в системе Tet-On Advanced. На основе линии клеток HEK 293T_Ku70-AID получена клеточная линия, в геном которой встроен ген osTIR-1 под контролем индуцибельного промотора, изучена кинетика деградации Ku70-AID и показано, что можно обратимо снижать концентрацию белка Ku70 в определённый момент времени до уровня, не детектируемого методом Вестерн-блот.
- Добавил в систему: Готтих Марина Борисовна