|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Оценка частоты наивных CD8 Т-клеток специфичных к минорным антигенам гистосовместимости ACC-1Y и HA-2дипломная работа (Бакалавр)
- Научный руководитель: Ефимов Г.А.
- Автор: Шитиков С.А.,
- Тип: Бакалавр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2017
- Аннотация: Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) широко применяется для лечения злокачественных заболеваний гемопоэтической системы. Возникающая при этом иммунная реакция Т-лимфоцитов донора на клетки реципиента может как способствовать уничтожению остаточных опухолевых клеток (реакция «трансплантат против опухоли», РТПО), так и приводить к повреждению здоровых тканей пациента (реакция «трансплантат против хозяина», РТПХ). РТПХ может принимать тяжелые формы, и в настоящее время является причиной смерти около 30% больных. Мишенями Т-клеточного аллореактивного иммунного ответа являются пептиды реципиента, представленные на поверхности клеток молекулами главного комплекса гистосовместимости HLA (Human Leukocyte Antigens). С целью уменьшения РТПХ подбираются максимально HLA-совместимые доноры При трансплантации от полностью HLA-совместимого донора мишенями Т-клеточного аллореактивного иммунного ответа являются минорные антигены гистосовместимости (Minor Histocompatibility Antigens - MiHA), то есть уникальные пептиды, которые представлены HLA на поверхности клеток реципиента, но не донора. Донорские лимфоциты могут распознавать MiHA реципиента, как чужеродный антиген, за счет того, что в ходе негативной селекции в тимусе донора этот антиген не представлялся, и MiHA-специфичные клоны не были удалены из репертуара. Существование MiHA обусловлено наличием несинонимичных однонуклеотидных полиморфизмов в геноме человека [2]. На данный момент описано около 60 минорных антигенов гистосовместимости [ref Falkenburg], при этом известно, что они имеют различную иммуногенность, то есть генетическое несоответствие по минорному антигену между донором и реципиентом лишь в определенной доле случаев приводит развитию иммунного ответа. Среди прочих факторов иммуногенность MiHA может определяться количеством клеток, специфичных к данным антигенам, в крови донора; аналогичная зависимость между силой иммунного ответа и количеством антиген-специфичных клеток ранее была показана для вирусных антигенов. Для проверки гипотезы, что иммуногенность минорного антигена связана с частотой встречаемости специфичных наивных Т-лимфоцитов нами были выбраны высокоиммуногенный антиген HA-2 (при HA-2 несовместимой трансплантации иммунный ответ развивается в 50-60% случаев) и менее иммуногенный ACC-1Y (иммунный ответ в 0-25% случаев) для которых была проанализирована частота встречаемости специфичных клеток в крови здоровых доноров. Для этого, на первом этапе работы было проведено генотипирование добровольцев по полиморфизмам, кодирующим HA-2 и ACC-1Y методом ПЦР с использованием аллель-специфичных праймеров. Были отобраны доноры, не не имеющие минорного антигена, обозначаемые HA-2-/- и ACC-1Y-/- Для оценки размера пулов HA-2 и ACC-1Y специфичных Т-клеток нами был использован протокол in vitro экспансии наивных антиген-специфичных клеток с помощью аутологичных дендритных клеток, нагруженных синтетическими пептидами [3]. Наивные клетки донора (~10^6 клеток), полученные методом магнитной сепарации из стандартной пробы крови донора, были разделены на отдельные культуры, в которых проводилась антиген-специфичная экспансия. Положительный или отрицательный результат экспансии определялся методом проточной цитометрии после окрашивания культур рекомбинантными флуоресцентно мечеными MHC-тетрамерами, несущими соответствующие MiHA пептиды. Частота MiHA-специфичных Т-клеток была оценена исходя из количества клеток, взятых в эксперимент, и соотношения положительных и отрицательных культур с помощью математического анализа [4]. Согласно полученным данным, частота наивных Т-клеток, распознающих антиген HA-2 (2*10-6< fHA-2= 5*10-6 <9.1*10-6) существенно превышает частоту наивных Т-клеток, распознающих ACC-1Y ( 8.2*10-8< fACC-1Y=2*10-7 <5.8*10-7). Этот результат соответствует большей иммуногенностью антигена HA-2 in vivo, и подтверждает предложенную гипотезу. Полученные нами частоты наивных клеток находится в пределах оценок для частот наивных Т-лимфоцитов, специфичных к вирусным антигенам. Существует несколько гипотез, объясняющих различия в объеме пула наивных Т-лимфоцитов для разных антигенов. Во-первых, для некоторых вирусных петидов показано, что размер наивного Т-клеточного пула определяется степенью гомологии антигена с одним из собственных пептидов организма и, соответственно, строгостью негативного отбора в тимусе. Аналогичный механизм можно предположить и для MiHA. Существуют такие MiHA, у которых оба аллеля способны связываться с HLA и являются потенциально иммуногенными, (кодоминантные MiHA). Так оба аллельных варианта ACC-1: ACC-1Y и ACC-1C связываются с HLA и вызывают иммунный ответ. В то же время у других (доминантно-рецессивных) MiHA, как, например, HA-2, один из аллельных вариантов не связывается с HLA и, соответственно, не презентируется в тимусе донора. Таким образом существенная часть Т-клеток, специфичных к кодоминантному MiHA, оказывается кросс-реактивна с собственным аллелем, и удаляется в ходе негативной селекции, уменьшая размер пула антиген-специфичных лимфоцитов по сравнению с доминантно-рецессивными MiHA. Эта гипотеза согласуется с полученными данными, но требует дальнейшей экспериментальной проверки на других антигенах. Понимание закономерностей формирования пула аллореактивных Т-клеток - необходимый этап на пути к повышению эффективности алло-ТГСК и успешной иммунотерапии с использованием лимфоцитов, специфичных к минорным антигенам гистосовместимости.
- Добавил в систему: Ефимов Григорий Александрович