|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Стабилизация рекомбинантного бактериолитического фермента PlyC, лизирующего клеточную стенку стрептококковдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Клячко Н.Л., Филатова Л.Ю.
- Автор: Яковлева К.С.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2008
- Аннотация: В настоящее время даже в высокоразвитых странах наблюдается увеличение количества заболеваний, вызванных стрептококками. Этот факт связан с появлением бактериальных штаммов, резистентных к антибиотикам. Бактериофаги, вирусы бактерий, и их литические ферменты можно рассматривать как потенциальную альтернативу антибиотикотерапии. В семидесятых годах прошлого века был выделен фермент, продуцируемый бактериофагом С1 при заражении им клеток стрептококка. В литературе он встречается под именем PlyC. Фермент (PlyC) гидролизует ковалентные связи петидогликанового остова стенок клеток стрептококков групп А и С, вызывая их гибель, и может рассматриваться как перспективный антибактериальный агент. Ограничением, препятствующим использованию данного фермента в медицине, является его низкая стабильность в условиях хранения (комнатная температура). При 25°С PlyC инактивируется по первому порядку, полностью теряя активность в течение 9 дней. Целью настоящей работы являлся подбор стабилизирующих агентов для данного фермента. К эксперименту по стабилизации и конечному препарату были предъявлены следующие требования: простота методик, нетоксичность и биоразлагаемость стабилизирующих реагентов, удобная форма использования. К стабилизации PlyC были применены два подхода: гликозилирование аминогрупп молекулы фермента олигосахаридами с различной длиной цепи и образование комплексов с полиэлектролитами и незаряженными полимерами различных молекулярных масс. На основании проделанной работы можно сделать следующие выводы: 1. При гликозилировании аминогрупп молекулы фермента стабилизирующий эффект зависит от длины цепи модифицирующего агента. Установлено, что мальтотриоза, содержащая 3 остатка глюкозы, является более эффективным стабилизатором, чем декстрины, в состав молекул которых входит 5, 7, 10 остатков глюкозы. 2. Стабилизация путем образования комплексов с декстранами выявила тот факт, что стабилизационный эффект зависит от молекулярной массы полимера и молярного отношения декстран/фермент. Увеличение стабильности на порядок было обнаружено при использовании декстрана с молекулярной массой 40 кДа при молярном отношении реагент/фермент, равном 4. 3. При стабилизации полиэлектролитами (декстрансульфатами) установлено, что стабилизирующий эффект зависит только от числа отрицательных зарядов полииона, приходящихся на молекулу фермента
- Добавил в систему: Филатова Любовь Юрьевна