Аннотация:Метод транзиентной экспрессии генов, основанный на доставке генетического материала вируса в растительную клетку при помощи Agrobacterium tumefaciens, широко используется в биологических исследованиях и фармацевтике. Однако, синтез целевых белков представляет собой искусственную ситуацию для растительной клетки, которая вынуждена производить большие количества белка.
Ранее в нашей лаборатории было показано, что суперпродукция зеленого флуоресцентного белка (GFP – green fluorescent protein) приводит к некротизации листьев. Для выявления генов, экспрессия которых изменяется в результате клеточной смерти, вызванной суперпродукцией белка, был проведен сравнительный анализ транскриптомов здорового листа Nicotiana benthamiana и листа непосредственно перед возникновением некроза методом вычитающей гибридизации. Наш интерес вызвало повышение экспрессии гомолога гена CDM1 (cell death marker 1, biotic cell death-associated protein) Nicotiana glutinosa. Идентифицированный нами новый ген был обозначен как «фактор, сопутствующий смерти клетки», или ФССК. Дальнейшее исследование мРНК ФССК показало, что, в отличие от листьев, корневая система растения имела повышенный уровень мРНК ФССК. Кроме того, транскрипционная активность гена ФССК в корнях коррелировала с возрастом однолетнего растения.
Целью данной работы было исследование роли ФССК в клеточной смерти растения Nicotiana benthamiana. Для достижения этой цели нами были поставлены следующие задачи:
1) Проверить наличие белкового продукта мРНК ФССК в растении;
2) Определить механизм работы ФССК.