ИСТИНА

В данной работе были созданы подходы, позволяющие с помощью направленного мутагенеза расширить рН-оптимум связывания кофермента NADP+ зависимыми мутантами PseФДГ. Было показано, что возможно независимое объединение мутаций, которые обеспечивают улучшение различных свойств PseФДГ – повышенную температурную и химическую стабильность, с одной стороны, и специфичность к NADP+, с другой. Таким образом, мы продемонстрировали аддитивность таких мутаций. Полученные данные свидетельствуют о том, что с помощью всего одной аминокислотной замены можно на порядок повысить сродство растительных ФДГ из A.thaliana и G.max к NADP+. Таким образом, впервые были получены ФДГ из растений с измененной коферментной специфичностью. В результате проведенных экспериментов было показано, что подход к изменению коферментной специфичности, разработанный в нашей лаборатории в приложении к бактериальным ФДГ, универсален и его можно использовать для изменения коферментной специфичности ФДГ из эволюционно далекого источника (растений). Практическая значимость работы. Формиатдегидрогеназа используется в процессах синтеза оптически активных соединений с участием NAD(P)+-зависимых дегидрогеназ в качестве фермента, способного регенерировать кофермент. Полученная нами NADP+-зависимая форма биокатализатора была успешно испытана в ряде зарубежных лабораторий. Создание высокоэффективных штаммов-продуцентов рекомбинантной NADP+-зависимой ФДГ из бактерий и растений дает основу для разработки процессов получения NADP+-зависимых мутантов ФДГ в больших количествах.