ИСТИНА

Митохондрии осуществляют широкий спектр функций, включая обеспечение клеток энергией за счет окислительного фосфорилирования. Для митохондрий характерно наличие собственной ДНК и системы биосинтеза белка, однако большое число макромолекул импортируется в органеллы из цитоплазмы. Было показано, что в ряде случаев в митохондрии транспортируются не только белки, но также и тРНК. К настоящему времени импорт тРНК в митохондрии был обнаружен у простейших, ряда растений, сумчатых млекопитающих, а также у почкующихся дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Механизм переноса тРНК в митохондрии и его специфичность значительно отличается от вида к виду. В случае дрожжей было показано, что из цитоплазмы в митохондрии импортируется два вида тРНК – тРНКLysCUU (Martin et al., 1979) и тРНКGln (Reinehardt et al., 2005). Импорт тРНК является высокоспецифичным процессом, так как одна из двух изоакцепторных лизиновых тРНК (тРНКLysCUU, далее ТРК1) направляется в митохондрии дрожжей, в то время как вторая (тРНКLysUUU) присутствует только в цитоплазме. Такое различие в локализации довольно близких тРНК может быть объяснено отличиями в структуре этих тРНК (Entelis et al., 1998). Следующий уровень селекции может быть опосредован белками, взаимодействующими с тРНК. Ранее в нашей лаборатории было показано, что для импорта ТРК1 должна быть аминоацилирована с помощью цитоплазматической лизил-тРНК-синтетазы, затем необходимо ее взаимодействие с предшественником митохондриальной лизил-тРНК-синтетазы (pre-Msk1р) (Tarassov et al., 1995b). Однако присутствия аминоацилированной ТРК1 и pre-Msk1р не достаточно для импорта ТРК1 в митохондрии, что говорит о необходимости дополнительных белковых факторов, направляющих ее импорт, так называемых факторов импорта. Данная работа была направлена на обнаружение белков, участвующих в импорте тРНК в митохондрии дрожжей и изучение их роли в этом процессе. При выполнении данной работы были получены указания на роль убикивитин-протеасомной системы деградации белков в импорте тРНК в митохондрии. Поэтому мы анализировали влияние различных компонентов этой системы на импорт ТРК1. Во время выполнения данной работы в нашей лаборатории были получены данные, указывающие на участие гликолитического фермента – енолазы – в импорте тРНК (Н.Энтелис, неопубликованные данные). Также недавно было показано, что енолаза в комплексе с другими гликолитическими ферментами присутствует во фракции внешних мембран митохондрий Arabidopsis thaliana (Giege et al., 2003). Помимо этого известно, что гликолитические ферменты обладают рядом альтернативных функций. Поэтому мы предположили, что одной из функций комплекса гликолитических ферментов могло бы быть участие в импорте тРНК в митохондрии. В связи с этим мы анализировали подробнее роль енолазы в импорте тРНК, ее митохондриальную локализацию в клетках дрожжей и осуществили поиск митохондриальных белков, образующих комплекс с енолазой. Целью данной работы было исследование роли белковых факторов и РНК-белковых взаимодействий в импорте тРНК в митохондрии дрожжей. Для этого в ходе исследования предполагалось выполнить следующие задачи: 1. Идентифицировать белковые факторы, потенциально участвующие в импорте тРНК в митохондрии дрожжей (так называемые факторы импорта) с использованием дву- и тригибридной систем в дрожжах. 2. Изучить влияние выявленных факторов на импорт тРНК в митохондрии дрожжей. 3. Исследовать роль гликолитического фермента – енолазы дрожжей - в импорте тРНК. Охарактеризовать митохондриальную локализацию енолазы в клетках дрожжей и идентифицировать митохондриальные белки, взаимодействующие с енолазой.