ИСТИНА

Актуальность темы Во всем мире проблема инфертильности имеет не только важное медицинское, но социальное значение. Демографические показатели России и многих стран мира свидетельствуют об увеличении частоты инфертильности у мужчин, достигающей в среднем от 30 до 50 %. Доля «мужского» фактора бесплодия в общей доле бесплодных браков составляет по некоторым данным от 30 до 40 % (Божедомов В.А., 2001, Тер-Аванесов Г.В., 2000). По данным некоторых авторов за последние десятилетия во всем мире отмечается прогрессирующее снижение качества спермы у мужчин, обеспечивающее их фертильность. Так при анализе эякулята в фиксированной мужской популяции с 1973 по 1992 годы содержание сперматозоидов в эякуляте ежегодно снижалось на 2,1 % (Auger J., 1997). За последние полвека отмечалось снижение показателей спермограммы почти в 3 раза (Irvine S, 1996). Частота бесплодия в браке колеблется от 8-29%. По оценке специалистов, в Европе бесплодны около 10% супружеских пар, в США - 8-15%, в России от 8 до 17,5% и в настоящее время нет тенденции к снижению (Кулаков В.И., 2005). На фертильность мужчин оказывают влияние различные социальные и демографические факторы, такие как загрязнение окружающей среды, стрессы, привычные интоксикации и другие (Курило Л.Ф., Гришина Е.М., 2006). Полиэтиологичность мужского бесплодия, сложность развития заболевания, функциональная взаимосвязь мужских гонад со всеми системами и органами, создают большие трудности в разработке адекватных методов лечения сперматогенеза (Тер-Аванесов Г.В., 2000). В связи с увеличением числа бесплодных браков, на фоне увеличения доли мужского бесплодия, актуальной задачей на сегодняшний день, является разработка новых методов лечения инфертильности у мужчин. В последние годы, появившиеся инновационные методики лечения, такие как нанотехнологии, генная инженерия, терапия стволовыми клетками, и успехи их применения, о которых периодически сообщается в мировой печати, заслуживают пристального внимания и могут рассматриваться в качестве перспективных методов для лечения мужского бесплодия. Имеются попытки применения культур, обогащенных различными видами стволовых клеток (сингенных, аутологичных и.т.д.) для восстановления фертильности у мужчин, результаты которых часто являются предметом дискуссии и служат предметом дальнейшего изучения (Ogawa T, et al., 2003, Shinohara T., 2006). Сперматогенез это процесс, осуществляющийся у мужчин на протяжении всей жизни. Обусловлен он делениями сперматогенных стволовых клеток, имеющих по некоторым данным неограниченный потенциал деления (Russell L.D., 1990). Это предположение основано на том, что эти клетки имеют высокий потенциал дифференцировки, самообновления, и быстрого деления. Эффективность трансплантации, при пересадке культур, обогащенных сперматогенными стволовыми клетками у животных, в различных вариантах по разным данным, колеблется от 18 до 80% (Brinster R.L.,2002; Nikolaos S., 2004). Большая разница в показателях, полученная при оценке результатов этих исследований, отсутствие стандартных методик выделения, культивирования трансплантации и оценки эффективности результатов обуславливает актуальность создания модели для изучения эффекта трансплантации обогащенными клеточными культурами или препаратами, содержащими стволовые клетки разных видов, а также для оценки возможности восстановления фертильности и безопасности такой процедуры. Выводы 1. Экспериментально вызванное угнетение сперматогенеза при формировании двухстороннего абдоминального крипторхизма развивается вследствие непосредственного поражения тестикулярной ткани, что приводит к развитию первичного гипогонадизма и характеризуется гипоплазией яичек, повышением уровней гонадотропинов в крови и снижением уровня общего тестостерона. После устранения абдоминального крипторхизма у экспериментальных животных происходит частичное восстановление сперматогенного эпителия с уменьшением гиперплазии клеток Лейдига. 2. Стрессовое воздействие оперативного вмешательства не оказывает влияния на фертильность экспериментальных животных, так как животные хорошо переносят фантомные (ложные) операции, оставаясь фертильными к 21 суткам. Двусторонний абдоминальный крипторхизм в течение 14 суток приводит к выраженной инфертильности у крыс. После его устранения происходит частичное восстановление фертильности в отдаленные сроки максимального наблюдения, не ранее 72 суток, при этом, чем больше экспозиция, тем меньше вероятность восстановления этой функции. 3. Интратестикулярное введение обогащенных клеточных культур стимулирует усиление гормональной функции клеток Лейдига. При отсутствии клеточной ксенотрансплантации нормальные показатели общего тестостерона достигаются за счет выраженной гиперплазии клеток Лейдига с признаками выраженного функционального напряжения. 4. Трансплантация обогащенных клеточных культур, является безопасным методом, который усиливает эффективность восстановления герминогенной и сперматогенной функции яичек. Использование данного метода приводит к усилению собственных регенераторных возможностей, более быстрому, чем в контроле, восстановлению сперматогенеза и показателя фертильности с достаточно высокими индексами. 5. Наиболее выраженное восстановление фертильности у крыс оказывает трансплантация обогащенной культуры клеток фетального яичка. Влияние ксенотрансплантации культур обогащенных стволовыми и прогениторными клетками других видов на сперматогенез выражено меньше. 6. Ксенотрансплантация культур, обогащенных стволовыми и прогениторными клетками различных видов, приводит к эффективному восстановлению утраченных при крипторхизме функций яичка, но зависит от степени повреждения тканей, которая определяется временем воздействия. Прогноз ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур у крыс с абдоминальным крипторхизмом, сроком более 21 суток - неблагоприятен. 7. В отдаленные сроки (на 72 и 108 сутки после ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур) у животных в тканях семенников были выявлены клетки трансплантированной культуры, окрашенные бромдиоксиуридином, а клетки меченные специфическими моноклональными антителами выявлены не были, что свидетельствует о том, что трансплантированные человеческие клетки длительно выживают в семенниках у крыс, стимулируя собственный сперматогенез животных. Сперматозоидов, обладающих человеческими антигенами, при идентификации моноклональными кроличьими антителами к суммарному антигену сперматозоидов человека у крыс выявлено не было. 8. После ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур в семенных канальцах происходит снижение индекса сперматогенеза, что говорит об активном увеличении форменных элементов сперматогенеза по отношению к общему количеству клеток Сертоли. Практические рекомендации 1. Экспериментальная модель двухстороннего абдоминального крипторхизма является удобной и достаточной для изучения и внедрения новых методов лечения инфертильности и гипергонадотропного гипогонадизма. 2. Клинический эффект восстановления функции яичек при ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур у экспериментальных животных зависит от длительности воздействия на яички при формировании абдоминального крипторхизма. В связи с этим использование данного метода при сроке экспериментального крипторхизма более 21 суток неэффективно. 3. Эффекта восстановления фертильности у крыс после ксенотрансплантации обогащенными клеточными культурами следует ожидать не ранее, чем через 72 дня после операции. 4. Наиболее опасными осложнениями при формировании двухстороннего абдоминального крипторхизма являются кровотечения и передозировка эфирного наркоза, поэтому необходимо уделять пристальное внимание контролю гемостаза и глубины эфирного наркоза. 5. Ксенотрансплантация осуществляется путем перфорации белочной оболочки тонкой иглой и введением клеточной культуры в субкапсулярное пространство. При этом игла должна направляться параллельно капсуле с одновременной гидропрепаровкой. Это максимально снижает риск повреждения семенных канальцев. 6. При формировании абдоминального крипторхизма яички животных должны располагаться в глубине латеральных каналов как можно дальше от белой линии, что исключает их повреждение при повторном доступе. 7. При формировании фиксирующей яичко спайки необходимо захватывать паратестикулярную клетчатку. При этом соединительнотканная спайка формируется более грубой и исключает миграцию яичка в мошонку. 8. Полученные в работе данные могут служить базовой моделью для изучения стимулирующего влияния ксенотрансплантации обогащенных клеточных культур на сперматогенез человека.