![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
1. Получены и охарактеризованы высокоспецифичные поликлональные антитела против фенобарбитала. Отобраны пригодные для поляризационного флуороиммуноанализа (ПФИА) высоко-специфичные моноклональные антитела к данному соединению. Методом поляризации флуоресценции были определены титры, константы аффинности и процент перекрестной реактивности антител. 2. Исследована взаимосвязь структурных особенностей иммуногена и флуоресцентного маркера (трейсера). Установ-лено, что конъюгирование фенобарбитала с белком-носителем или флуоресцирующей меткой необходимо проводить по одному и тому же положению молекулы антигена. 3. Исследовано влияние структуры иммуногена на чувствительность ПФИА фенобарбитала. Установлено, что с увеличением длины химической структуры ("ножка") между антигеном и белком-носителем в иммуногене, - в получаемой антисыворотке снижается доля высокоаффинной фракции антител, что приводит к снижению чувствительности анализа. 4. Изучено влияние структуры трейсера на чувствительность и специфичность ПФИА фенобарбитала. Показано, что с увеличением длины "ножки" между антигеном и флуоресцирующей меткой снижаются величины титра, константы аффинности антител и нижнего предела обнаружения антигена, но улучшается специфичность анализа. 5. Рассмотрена принципиальная возможность использования в ПФИА одной поликлональной антисыворотки как для специфи-ческого определения фенобарбитала, так и для анализа барбитуратов. Показано, что антисыворотка с наиболее длинной "ножкой" в иммуногене была специфична к фенобарбиталу в случае применения трейсера с длинной "ножкой", и к группе барбитуратов - в случае трейсера с короткой "ножкой" между гаптеном и флуорофором. 6. Разработан и апробирован в клинических условиях метод ПФИА фенобарбитала в сыворотке крови. Полное время анализа 20 образцов 12-15 миинут. Нижний предел обнаруженния антигена 1,2 мкг/мл.